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分析化学

第十四章荧光分析法

第一节概述

•某些物质受到光照射时，吸收某种波长的光之后，会发射出比原来吸收波长更长的光，当激发光停止照射，这种光线也随之消失，此光称为

荧光。

•定性分析：物质分子结构不同，所吸收光的波长和发射光的荧光波长也不同。

F

•定量分析：同种物质浓度不同，所发射的荧光强度（）不同。

分类：•根据激发光的波长范围不同，可分为：X射线荧光分析法；紫外－可见荧光分析法；红外荧光分析法

•根据待测物质的存在形式，分为分子荧光法和原子荧光法。•根据激发所用的能源分为光致发光法和化学发光法。

-10-12

-7

特点：•灵敏度高：10～10g/ml（紫外10）•线性范围宽：3～5个数量级（紫外1~2）

•选择性好：荧光衍生试剂

第三节荧光与分子结构的关系

一、荧光效率

发荧光的两个必要条件:•分子能吸收光子而跃迁至激发态•激发态分子能以光的形式释放能量

荧光效率（f）=发出光子数/吸收光子数如果一个分子将吸收的光子全部释放，则其量子产率为100%。

f

某些化合物的荧光效率

化合物荧光效率溶剂

荧光素0.92（0.1MNaOH）曙红0.19（0.1MNaOH）罗丹明B0.97（乙醇）

蒽0.31（己烷）核黄素0.26（水，pH7）菲0.10（乙醇）

萘0.12（乙醇）酚0.22（水）叶绿素0.32（苯）

二、荧光强度与分子结构的关系

荧光通常发生在具有刚性结构和平面结构的p-电子共轭体系分子中，任何有利于提高p-电子共轭度的结构改变，都将提高荧光量子产率，或

使荧光波长向长波方向移动。

化合物荧光效率平均波长苯0.07283萘0.23334蒽0.36402

刚性、平面结构可以减少分子的振动，使分子与溶剂或其它溶质分子的相互作用减少，也就减少了碰撞去活的可能性。

-ooo-oo

coo-coo-

荧光素：氧桥把两个环固定在一个平面上，具有酚酞：无氧桥把两个环固定，不能很好的共平面，

平面结构，强荧光物质为非荧光物质

三、影响荧光强度的外界因素

•溶剂极性，跃迁吸收带长移，吸收强度，em长移，F。

λ

•溶剂黏度，减少溶质分子间碰撞机会，无辐射跃迁减少，F。

•温度，分子碰撞几率，无辐射跃迁，F

pH：不同的pH值，化合物所处状态不同，不同化合物的分子与其离子在电子构型上有所不同，因此，它们的荧光强度和荧光光谱就有一定的差

别例：苯酚OHO_

OH_

离子化后，荧光消失

H+

pH≈1有荧光pH≈13无荧光

荧光熄灭剂的影响

•荧光熄灭（荧光悴灭）：荧光物质分子与溶剂分子或溶质分子的相互作用引起F降低的现象。

•引起荧光强度下降的物质－荧光熄灭剂•卤素离子、重金属离子、氧、硝基化合物、羰基化合物等（选择性）

表面活性剂的影响•胶束溶液中，减弱了荧光分子之间的碰撞，F•胶束溶液的增溶、增稳、增敏作用大大提高了荧光分析法的灵敏

性和稳定性。

第四节荧光分光光度计

与分光光度计有两点不同①两个单色器②检测器与激发光成直角，