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分析化学
第十四章荧光分析法
第一节概述
•某些物质受到光照射时,吸收某种波长的光之后,会发射出比原来吸收波长更长的光,当激发光停止照射,这种光线也随之消失,此光称为
荧光。
•定性分析:物质分子结构不同,所吸收光的波长和发射光的荧光波长也不同。
F
•定量分析:同种物质浓度不同,所发射的荧光强度()不同。
分类:•根据激发光的波长范围不同,可分为:X射线荧光分析法;紫外-可见荧光分析法;红外荧光分析法
•根据待测物质的存在形式,分为分子荧光法和原子荧光法。•根据激发所用的能源分为光致发光法和化学发光法。
-10-12
-7
特点:•灵敏度高:10~10g/ml(紫外10)•线性范围宽:3~5个数量级(紫外1~2)
•选择性好:荧光衍生试剂
第三节荧光与分子结构的关系
一、荧光效率
发荧光的两个必要条件:•分子能吸收光子而跃迁至激发态•激发态分子能以光的形式释放能量
荧光效率(f)=发出光子数/吸收光子数如果一个分子将吸收的光子全部释放,则其量子产率为100%。
f
某些化合物的荧光效率
化合物荧光效率溶剂
荧光素0.92(0.1MNaOH)曙红0.19(0.1MNaOH)罗丹明B0.97(乙醇)
蒽0.31(己烷)核黄素0.26(水,pH7)菲0.10(乙醇)
萘0.12(乙醇)酚0.22(水)叶绿素0.32(苯)
二、荧光强度与分子结构的关系
荧光通常发生在具有刚性结构和平面结构的p-电子共轭体系分子中,任何有利于提高p-电子共轭度的结构改变,都将提高荧光量子产率,或
使荧光波长向长波方向移动。
化合物荧光效率平均波长苯0.07283萘0.23334蒽0.36402
刚性、平面结构可以减少分子的振动,使分子与溶剂或其它溶质分子的相互作用减少,也就减少了碰撞去活的可能性。
-ooo-oo
coo-coo-
荧光素:氧桥把两个环固定在一个平面上,具有酚酞:无氧桥把两个环固定,不能很好的共平面,
平面结构,强荧光物质为非荧光物质
三、影响荧光强度的外界因素
•溶剂极性,跃迁吸收带长移,吸收强度,em长移,F。
λ
•溶剂黏度,减少溶质分子间碰撞机会,无辐射跃迁减少,F。
•温度,分子碰撞几率,无辐射跃迁,F
pH:不同的pH值,化合物所处状态不同,不同化合物的分子与其离子在电子构型上有所不同,因此,它们的荧光强度和荧光光谱就有一定的差
别例:苯酚OHO_
OH_
离子化后,荧光消失
H+
pH≈1有荧光pH≈13无荧光
荧光熄灭剂的影响
•荧光熄灭(荧光悴灭):荧光物质分子与溶剂分子或溶质分子的相互作用引起F降低的现象。
•引起荧光强度下降的物质-荧光熄灭剂•卤素离子、重金属离子、氧、硝基化合物、羰基化合物等(选择性)
表面活性剂的影响•胶束溶液中,减弱了荧光分子之间的碰撞,F•胶束溶液的增溶、增稳、增敏作用大大提高了荧光分析法的灵敏
性和稳定性。
第四节荧光分光光度计
与分光光度计有两点不同①两个单色器②检测器与激发光成直角,
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