HPV基因分型检测试剂盒常见问题.ppt

HPV基因分型检测工程

临床试验实际问题

目录试验开展实验室要求HPV临床样本的采集方法及本卷须知临床试验操作本卷须知临床试验结果分析及常见问题

HPV基因分型检测试验工程

——试验开展实验室要求

临床基因扩增实验室设置的一般原那么各区独立注意风向因地制宜方便工作“十六字方针”

基因扩增检验实验室工作流程进入各个工作区必须遵循严格的单一方向顺序!

最正确的HPV基因分型实验室布局出口入口工作流向临床样本收集与储存PCR前区域PCR后区域

最正确的HPV基因分型实验室布局每间房间必须有其专用的工作服及一次性手套；每个工作区都应有独立的一套仪器设备及耗材；不同区域的仪器设备及耗材不能混用;临床样本(原始容器中)样本制备区试剂准备区超净工作台DNA提取PCR扩增区导流杂交区结果通知患者

根底HPV基因分型实验室布局〔1〕临床样本(原始容器中)样本制备区超净工作台DNA提取导流杂交区结果通知患者PCR区域

根底HPV基因分型实验室布局〔2〕每个区域必须有其专用的工作服及一次性手套；每次操作必须更换；涉及到公用仪器使用，必须注意防止交叉污染，定时使用次氯酸钠溶液擦洗；

实验室环境本卷须知工作区域必须始终保持清洁整齐；所有实验台面及地面均应保持清洁；所有实验废料及垃圾使用专用垃圾带装好后，封口处理；在每次工作前后对工作台面进行消毒液〔次氯酸溶液〕擦洗、消毒酒精擦洗工作，并在完成工作后开启紫外灯进行灭菌；

实验室制度及人员配备有效的临床结果严格规章制度并遵守操作人员具有专业技术知识和经验强烈责任感工作态度认真细心严格遵守HPV基因分型各项工作的标准操作规程

实验所需仪器HybirMax?医用核酸分子快速杂交仪PCR扩增仪超净工作台水浴锅离心机旋涡混合仪微量移液器

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——HPV临床样本的采集方法及本卷须知

HPV临床样本的采集方法及本卷须知标本收集标本保存

标本收集检查前告知病人本卷须知：月经正常妇女，在月经来潮后10～18天为最正确检查时间。检查前48小时内不要作阴道冲洗，不要用避孕药膏等阴道内用药物。检查前48小时最好不要行性生活。检查前不进行醋酸或碘液涂抹。

标本收集

步骤－先脱掉裤子，然后按医生指示仰卧于一张检查床上。

步骤二由医生以窥阴器或阴道张开器暴露宫颈。然后使用专用的HPV采样刷置于宫颈口采集标本。〔最好在取样前先用棉签擦去宫颈分泌物〕

标本收集步骤四慢慢取出宫颈刷，将其放入标有病人编号的取样管中，取样管内已加有专用细胞保存液，折断其刷头入管中，拧紧瓶盖。步骤三将专用宫颈刷置于宫颈口，轻轻搓动宫颈刷使其顺时针旋转5圈。

标本保存样本一经采集，那么应尽可能快的送至检测实验室。如假设不能马上送检样本，请于4℃保存，请在2个星期之内进行检测。

标本收集标准收集中本卷须知：使用凯普专用取样器及保存液，可抑制细菌生长，保持DNA完整性。样本收集中为保存足够的宫颈细胞标本，注意切勿将宫颈刷头丢弃。宫颈保存系统包装翻开后，必须立即进行采样，并连同刷头置于取样管中。如果同时进行细胞学检查，应先采细胞学样品。宫颈刷头折断、试验取样时，请小心操作，切忌大力震荡取样管，造成试剂及样本溅出影响检测结果或造成污染。取样管上标示的名称须与患者一一对应。取样后，切记拧紧取样管管盖。

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——临床试验操作本卷须知

因操作欠标准导致的问题分析

移液器：①严禁大力来回拧动；②严禁调至容量之外使用；③第二档为排空档，不得作吸取之用；④吸头应浸入液面2—3mm处吸取；⑤严禁将有液体的移液器平放或倒置；⑥混匀沉淀时，将吸头紧贴于沉淀上方管壁，反复吸取液体，将沉淀反复混匀，溶解；⑦每周用75%乙醇清洗一次，假设有污染随时清洗。

〔二〕实验室布局不合理引起的污染问题1、样品处理不进行隔离，样品中各种核酸片段均会通过空气进行传播。2、PCR结果检测实验室和其它实验室在一起，会出现严重的扩增子污染。3、仪器设备及工作服等〔尤其是加样器〕公用，也会造成严重污染。4、实验室操作垃圾〔吸头、离心管、样品杯等〕乱放，飘散在空气中的核酸片段、病原微生物可造成实验室污染。

〔三〕PCR操作中存在问题分析1.阳性变阴性2.阴性变阳性3.PCR结果不稳定

1.阳性变阴性

(1)有些阳性病人，经过PCR检测后为阴性，可能有两种情况：一是采集标本方法或部位不正确，二是如果病人取样部位病原体消失，需根据病人的病理情况采样。

(2)标本保存不当，可引起PCR失败。收集的标本乱放〔未放冰箱〕，