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聚合酶链式反应（PCR）

、实验目的

1、 了解PCR反应的基本原理。

2、了解PCR反应的优化条件和PCR的应用。3、掌握PCR产物纯化的方法。实验原理

PCR是一种选择性体外扩增DNA或RNA的技术。1990年，KaryB.Mullis发明了PCR技术，并因此在1995年荣获诺贝尔化学奖。PCR技术使分子生物学研究一下子获得了突破，并且随着PCR技术的日趋完善，PCR技术在人类生活中的应用也越来越广泛。PCR、分子克隆和DNA序列分析构成了现代分子生物学实验工作的基础。PCR反应包括三个基本步骤:①变性:目的双链DNA片段在94°C下解链；②退火：两中寡核苷酸引物在适当温度（50°C左右）下与模板上的目的序列通过氢键配对；③TapDNA聚合酶在最适温度下（72C），以目的DNA合成。这三个基本步骤组成一轮循环，理论上每一轮循环将使目的DNA扩增一倍。这些经合成产生的DNA又可作为下一轮循环的模板，所以经25~35轮循环就可使目的DNA片段扩增达106倍。

二、 器材与试剂

器材：移液器，EP管，热盖PCR仪，电泳仪，量筒，锥形瓶，微波炉，电子天平，紫外照色仪

试剂：引物，模板，TaqDNA聚合酶，原料（dNTPs），缓冲液与Mg2+，H2O,2*PCRmix溶液，DNA染料

三、 实验步骤

1、PCR反应

⑴在EP管中依次下列试剂（50pl反