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比色法羟自由基测定条件的优化与应用的中期报告

本次实验旨在优化比色法测定羟自由基浓度的条件，并应用该方法在葡萄酒中的羟自由基浓度测定中。以下是中期报告：

一、实验设计

1.1实验方法

本次实验采用分子内自由基引发体系（HAT）制备羟自由基（?OH），加入甲基羟基苯（TMB）与羟自由基发生反应，生成蓝色产物TMBox。通过测定吸光度来计算羟自由基的浓度。

优化实验中，我们将调整反应液体系中的pH值、反应时间、反应体系中各物质的浓度、发生反应的温度等因素，以寻求最佳反应条件。

1.2实验步骤

1）制备HAT反应体系：向有机溶剂（DMSO）中依次加入DMPO（5.0mM）、TMB（0.15mM）、EDTA（5.0mM），调整pH值至指定值。

2）制备羟自由基：向HAT反应体系中加入大气压下臭氧化过的肉桂醛（10mM），振荡反应30min。

3）测定吸光度，计算羟自由基的浓度。

1.3期望结果

优化出最佳测定条件，成功应用该方法测定葡萄酒中的羟自由基浓度。

二、实验结果

我们对反应时间、pH值、EDTA浓度、TMB浓度进行了优化，得出了以下结论：

2.1反应时间的优化

反应时间对反应效率和产物的稳定性有重要影响，因此我们测试了不同时间下反应产物的量变化情况。

结果显示，在5min至30min范围内，反应产物量增加明显；随着反应时间的延长，产物量的增加趋势逐渐缓和。因此选择30min作为反应时间。

2.2pH值的优化

在反应溶液的pH值较高时，产物TMBox可能会分解，影响测定结果。我们将pH值分别调整为6.0、6.5、7.0、7.5、8.0进行测定。

结果显示，在pH值为7.0时，产物TMBox的吸光度最高，因此确定pH值为7.0。

2.3EDTA浓度的优化

由于羟自由基对金属离子敏感，加入EDTA可以稳定反应体系。我们测试了不同浓度下的反应体系的羟自由基浓度。

结果显示，10mM下的EDTA浓度可以满足反应体系的稳定性要求，因此确定EDTA浓度为10mM。

2.4TMB浓度的优化

TMB反应的浓度会影响读数，我们计算不同的浓度下TMBox的吸光度。

结果显示，在TMB浓度为0.15mM时，反应所得的TMBox吸光度最高，因此选择TMB浓度为0.15mM。

三、后续实验计划

我们将用已优化的测定条件，在葡萄酒中测定羟自由基的浓度。根据相应的葡萄酒样品浓度，制定标准曲线，用于测量葡萄酒样品中的羟自由基浓度。