生物制药基因工程.pptVIP

基因工程制药的具体步骤①获得目的基因可以人工合成，或从生物基因组中分离；②构建重组载体将带有目的基因的外源DNA片段连接到可复制、具有选择标记的载体上，形成重组DNA分子。③导入重组载体将重组载体导入适当的受体细胞（宿主菌），形成可自我复制或增殖的无性繁殖系（克隆）。④筛选、鉴定和分析从细胞繁殖群中筛选、培养获得了重组载体的克隆，提取重组质粒，分析得到扩增的目的基因。⑤构建工程菌将目的基因导入适宜的受体细胞中，经筛选、鉴定和分析测定，获得正确稳定表达的基因工程菌（细胞）。⑥培养基因工程菌大量培养获得的基因工程菌，使之实现功能表达，产生出所需要的目的基因产物。⑦表达产物的提取、分离和纯化与检验、包装，等。基因工程制药的关键技术（1）获得目的基因主要是采用化学合成法、构建基因文库法和酶促合成法。（1）化学合成法将核苷酸单体用3’,5’磷酸二酯键连接，适用于已知的核苷酸序列、小分子蛋白质或多肽的编码基因。（2）构建基因文库法适用于原核生物基因的分离，是早期使用的方法。当制备的克隆数目多到足以把某种生物的全部基因都包含在内时，这一组克隆DNA片段的集合体，就称为该生物的基因文库。完整的基因文库应该含有染色体基因组DNA的全部序列。（3）酶促合成法以目的基因的mRNA为模板，用逆转录酶合成其互补