110530仪器分析实验修改1205修zhp.pdfVIP

实验二苯系物的高效液相色谱法分析

一、实验目的

1.掌握高效液相色谱仪器的构造及基本使用方法。

2.理解和掌握归一化法对组分含量的测定。

二、基本原理

采用非极性的十八烷基键合相为固定相和极性的甲醇-水溶液为流动相的反相色谱分离

模式特别适合于同系物如苯系物的分离。苯系物具有共轭双键，但因共轭体系的大小和极性

不同，因而在固定相和流动相之间的分配系数不同，导致在柱内的移动速率不同而先后流出

柱子。苯系物在紫外区有明显的吸收，可以利用紫外检测器进行检测。在相同的实验条件下，

将测得的未知物的保留时间与已知纯物质对照进行定性分析。

当试样中的各组分都能流出色谱柱，并在色谱图上显示色谱峰时，可用归一化法定量分

析。

设试样中有n个组分，各个组分的质量分别为m,m,……..m，其中组分i的质量分数

12n

w可按下式计算：

i

w=m/m×100%=m/m+m+…+m×100%=Af/Af+Af+…Af×100%

iii12nii1122nn

f为质量校正因子，得质量分数，A为峰高（峰面积）。

ii

若个组分的f值相同，例如同系物中沸点接近的各组分，上式可简化为：

w=m/m×100%=m/m+m+…+m×100%=A/A+A+…A×100%

iii12ni12n

三、仪器及试剂

1.高效液相色谱仪（配紫外检测器，检测波长254nm）

2.超声波清洗机

3.40µL平头微量注射器

4.苯、甲苯、联苯

5.流动相的体积配比为：甲醇：水=80：20

四、实验步骤：

1.打开输液泵电源，仪器自检。

2.从输液泵显示屏输入流动相流速，启动泵。

3.打开紫外检测器电源及氘灯。

4.打开色谱工作站及采集器电源，建立方法。

5.用流动相冲洗色谱柱，察看基线，基线稳定进样。

6.实验完成后按顺序关机。

五、数据处理

1.指认苯和甲苯的色谱峰；

2.归一化法给出苯和甲苯的含量。

六、结果讨论

1.增加流动相中水的比例或酸度，会对色谱图产生什么影响？

2.归一化法应用的前提是什么？

实验四有机化合物的紫外吸收光谱

一、实验目的

1、了解紫外光谱仪的结构和原理，学习紫外光谱仪的使用方法；

2、了解有机化合物的两种主要吸收光谱：n→π*、π→π*，掌握溶剂性质对这两

种吸收光谱的影响。

3、掌握紫外可见分光光度计的使用。

二、基本原理

1、分子主要有四种跃迁类型，跃迁所需能量为：

σ→σ*n→σ*π→π*n→π*

π→π*跃迁：

π电子跃迁到反键π*轨道所产生的跃迁，这类跃迁所需能量比σ→σ*跃迁小，若无共

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轭，与n→σ*跃迁差不多。200nm左右，吸收强度大，在10~10范围内。

2、若体系共轭，E减小，λ增大，波长向长波方向移动。含不饱和键的化合物发生π→

π*跃迁：如C=O,C=C等。

n→π*跃迁：

含杂原子不饱和基团（—C≡N，C＝O）

能量最小，λ约在200~400nm（近紫外区）

三、仪器与试剂：

1.紫外可见分光光度计（T6：北京普析通用）。

2.苯，苯酚，乙醇：分析纯。

-4

3.苯酚/水、苯/水、苯/乙醇溶液：~10mg/ml。

四、紫外可见分光光度计操作步骤：

1．开机

（1）计算机；

（2）紫外可见分光光度计；