酶的测定(详细).pdfVIP

一、脲酶测定(比色法)

1.方法原理

脲酶广泛存在于土壤中，它能酶促尿素分解生成氨、二氧化碳和水。测定脲酶的方法很

多，包括比色法、扩散法、电极法等，其中比色法最为常用。现介绍苯酚一次氯酸钠比色法，

该方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚次氯酸钠作用(在碱性溶液中及在亚硝基铁氰

化钠催化剂作用下)生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。

2.试剂配制

（1）pH6.7柠檬酸盐溶液：取368g柠檬酸溶于600mL蒸馏水中，另取295g氢氧化钾溶于

水，再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将pH调至6.7，并用水稀释至2L。

（2）苯酚钠溶液：称取62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mL甲醇和18.5mL丙酮，后用乙

醇稀释至100mL（A液），保存再冰箱中。称取27g氢氧化钠溶于100mL水中（B液），

保存于冰箱中。使用前，取A、B两液各20mL混和，并用蒸馏水稀释至100mL备用。

（3）次氯酸钠溶液：用水稀释制剂至活性氯的浓度为0.9％，溶液稳定。

（4）10％尿素溶液：10g尿素溶于100mL水中。

（5）N的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水稀释至1L，则得