非水相生物催化-(1)省公开课一等奖全国示范课微课金奖PPT课件.pptxVIP

第4章非水相生物催化;概述;非水相生物催化;直到1984年，Klibanov等在《Science》上报道了脂肪酶在有机介质中不但含有较高催化活性，而且含有极高热稳定性，同时同种酶在不一样有机溶剂中能够表现出不一样立体选择性。之后，非水相生物催化研究才引发人们广泛关注和重视，相关研究报道日渐增多，并取得了突破性进展。开辟了非水相酶学（Non-aqueousenzymology)这一崭新研究领域，拓展了酶应用范围。

年，Klibanov在《Nature》上综述了酶在有机溶剂中催化特征以及展望未来非水相生物催化发展趋势

;酶活性和选择性实质上取决于酶空间结构，尤其是高级结构；而酶结构又取决于其分子内部以及它与周围环境之间各种作用力，如离子键、氢键等。

改变酶一级结构是从根本上改变酶空间结构，而构象改变能够经过微环境调整来实现。

介质多样化才能适应底物和催化剂多样化。;非水介质酶催化研究内容;酶非水相催化几个类型;有机相酶反应优点;单一水或缓冲溶液系统;水-有机溶剂单相系统;水-有机溶剂两相系统;值得注意是增加搅拌能够增加质量传递以提升酶催化反应速度，但不正确搅拌会产生机械和化学张力而造成酶失活。

经过选择适当有机溶剂以及适度水相调整(如pH、盐浓度等)能够控制反应物在两相中分配。

假如在均相系统中存在严重底物或产物抑制，那么使用两相系统可望在很大程度上缓解这一问题。

;Topphase;乳状液与微乳液系统;原理：形成反胶束系统，水分子聚集在反胶束内核中形成“微水池”，里面容纳了酶分子，这么酶被限制在含水微环境中，而底物和产物能够自由进出胶束。

优点：①组成灵活性；②热力学稳定性和光学透明性；③逆胶束有非常高比界面积；④逆胶束相特征随温度而改变。

;正胶束体;反胶束体系;雾点系统;微水有机溶剂单相系统;;;超临界流体;超临界流体对多数酶都能适用，酶催化酯化、转酯、醇解、水解、羟化和脱氢等反应都可在此体系中进行，但研究得最多是水解酶催化反应。这种溶剂体系最大优点是无毒、低粘度、产物易于分离。

超临界流体粘度介于气体与液体之间，其扩散性比普通溶剂高1~2个数量级。超临界气体在临界点附???温度或压力有一点微小改变都会造成底物和产物溶解度极大改变，因而很轻易调控超临界流体中酶催化反应特征，如反应速率和选择性。

该体系缺点是需要有能耐受几十个兆帕高压容器，而且减压时易于使酶失活。另外，有些超临界流体如二氧化碳可能会与酶分子表面活泼基团发生反应而引发酶活性丧失。

;离子液体;与普通有机溶剂最大区分在于：

①离子液体不会挥发(没有蒸气压)，对环境比较友好，用于工业生产也相对比较安全；

②它们与许多有机溶剂互不相溶，能够形成有机溶剂-离子液体两相系统或者有机溶剂-水-离子液体三相系统，从而为溶剂工程在生物催化反应中应用提供了新可能。

普通而言，离子液体通常有三种方式被应用于生物催化过程：①作为单一溶剂；②作为共溶剂添加于水相系统中；③与水形成两相系统。

;无溶剂或少溶剂反应系统;在无溶剂系统中适当提升反应温度，能够促进反应物分子扩散和混合，从而提升酶反应速度。

当反应物均为固体颗粒时，也不一定非要用溶剂使其溶解。

反应完全能够在含酶液相中进行，尽管该液相有可能完全隐藏在反应物固体颗粒之间缝隙中而看不见。为了形成这一隐形液相，普通只需加入极少许(比如反应物重量10%)某种“溶剂”，而最好溶剂可能就是水，因为水通常会使酶产生最高催化活力。

;酶在有机介质中催化特征;底物专一性;从酶和底物间或键间自由能利用来分析：在水溶液中，酶活性中心极性基团和极性强底物分子之间形成强氢键，需要更多能量来破环它们之间氢键，以利于酶-底物络合物形成，造成对应反应速度降低（即酶与底物复合物结合能高，故在水溶液中倾向于选择极性低底物）；而在有机相中，因其不能形成氢键，酶对底物选择性朝相反方向进行。

酶和底物之间结合能是酶催化反应主要推进力，底物必须从反应介质中解析出来与酶活性中心结合。很多酶活性中心都是疏水性，它们与疏水底物反应最有利，因为疏水性底物更轻易从水中解析抵达疏水性活性中心。然而以有机溶剂替换水后，疏水性底物与有机溶剂间相互作用增强，底物从溶剂抵达活性中心就比在水中困难，从而减慢了酶催化反应速度。而亲水性底物在疏水性较强溶剂中则轻易进入酶活性中心，从而加紧酶催化反应速度。

;;立体选择性;原因之一：是因为在水和有机溶剂中，底物两种对映体将水从酶分子疏水性结合位点上置换出来能力有所不一样。

原因之二：在疏水性差溶剂里，疏水性基团进入酶疏水袋中比暴露在溶剂中热力学平衡更为有利，所以，酶分子中亲核基团易于进攻位置适当底物分子羟基，这么得到某个构型产物。而在疏水性强溶剂中，疏水性基团更倾向于暴露在溶剂中，而不易进入酶疏水袋，从而失去了酶对底物立体