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PAEs对原代培养的大鼠脂肪细胞PPAR-γ2表达的影响的开题报告

开题报告

论文题目:PAEs对原代培养的大鼠脂肪细胞PPAR-γ2表达的影响

研究背景：

环境污染物对人体健康的危害受到了广泛关注。其中，塑料制品中常出现的一种化合物——邻苯二甲酸酯（PAEs），已被证明对人体内分泌系统具有潜在的危害。研究表明，在体内摄入PAEs后，这些化合物会通过影响脂肪细胞的信号传导通路并干扰生物体脂肪代谢过程来影响体重控制和代谢疾病的进展。因此，探究PAEs和脂肪细胞之间的相互作用，对于我们更好地了解PAEs的毒性机理和预防相关疾病具有重要意义。

研究目的：

本研究旨在探究PAEs对原代培养的大鼠脂肪细胞PPAR-γ2表达的影响，为进一步探究其毒性机理提供参考。

研究内容：

1.培养大鼠脂肪细胞，并鉴定细胞纯度。

2.暴露脂肪细胞于PAEs，不同浓度的PAEs（0、10、50、100μmol/L）和不同暴露时间（24、48、72h）。

3.采用Real-TimePCR技术检测脂肪细胞中PPAR-γ2的表达水平。

研究方法：

1.培养大鼠脂肪细胞：

将6-8周龄的大鼠脂肪组织分离、切割并转移至新的培养皿中。加入DMEM培养基、10%胎牛血清（FBS）和1%抗生素/抗真菌（PSF），置于37℃，5%CO2的恒温恒湿培养箱中。细胞形态发展至全部呈现类似蚕豆状时，进行暴露实验。

2.PAEs处理：

在培养基中加入不同浓度的PAEs储备液（0、10、50，100μmol/L），平行处置不同时间（24、48、72h）的脂肪细胞。联合两个因素得到12个处理组（含对照组）。

3.Real-TimePCR检测PPAR-γ2表达：

从各处理分组中，提取RNA并进行DNaseI消化处理。合成cDNA，使用SYBRGreenI代替EtBr，采用Real-TimePCR技术检测PPAR-γ2mRNA表达水平。

预期结果：

1.不同浓度的PAEs、暴露时间对脂肪细胞的形态无显著影响。

2.暴露PAEs能显著抑制脂肪细胞PPAR-γ2mRNA的表达，有剂量-效应、时间-效应相关性。

3.上述结果可能由于PAEs累积在脂肪细胞中，影响了脂肪细胞在体内的正常功能进而影响整个脂肪代谢通路，继而导致体重增加及其它代谢性疾病的发生。

意义：

1.为进一步探究PAEs对脂肪细胞代谢调控的毒性机理提供重要提示。

2.为防范和控制环境污染在公共卫生和环保上的影响提供参考。

参考文献：

1.赵遵娜,东旭生态,宁家坤,等.邻苯二甲酸酯污染对脂肪细胞的影响[J].环境科学学报,2019,39(4):1607-1616.

2.董冬梅,侍丽云,郭广志,等.过氧化物酶体增殖物激活受体α在邻苯二甲酸酯毒性中的作用[J].环境科学与技术,2020,43(12):10-16.

3.何兆敏,李金顺,刘俊,等.邻苯二甲酸酯对人类脂肪细胞增殖、脂肪代谢和细胞分化的影响[J].中华预防医学杂志,2020,54(5):471-477.