备课素材：乳腺生物反应器 高二下学期生物人教版选择性必修3.docx

乳腺生物反应器

2019版高中生物学选择性必修三提到乳腺生物反应器：

那么，乳腺生物反应器原理是什么？

乳腺生物反应器原理是应用转基因技术，将目的基因转移到尚处于原核阶段的动物胚胎中（通常是受精卵）。经胚胎移植得到转基因乳腺表达多肽药物，如蛋白酶、抗体等蛋白的技术。

外源基因在乳腺细胞中特异性表达，需要乳腺蛋白基因的一个启动子和调控区。这需要一个引导泌乳期乳腺蛋白基因表达的序列，这样才能将外源基因置于乳腺特异性调控序列控制之下，使其在乳腺中表达，再通过回收奶获得具有生物活性的目的蛋白。

启动子是位于结构基因上游的一段可以行使转录起始功能的序列（限于高中知识，结构介绍略，如图）。不同类型的细胞具有不同的启动子，这使得细胞能够表达不同的基因，从而实现细胞特异性。启动子决定了目的基因在何时何处表达，而使用乳腺生物反应器的目的是特异性的生产目的基因蛋白。当目的基因与乳腺蛋白基因的启动子重组时，目的基因获得了在乳腺细胞中特异表达的能力，因而可以在乳腺细胞中高表达。

2.步骤——利用乳腺生物反应器生产人的血清白蛋白

（1）通过限制酶获得目的基因或人工合成目的基因获得人的血清白蛋白基因。

（2）人的血清白蛋白基因和乳腺组织特异性表达的启动分子等调控组建重组在一起，其中，乳腺蛋白基因（BLG基因）5′端调控序列作为启动子装载，构建基因表达载体，启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动目的基因转录出mRNA，所以能使目的基因在动物的乳腺细胞中特异性表达。

启动子在使用特点上又可分为三大类：组成型启动子、特异性启动子、诱导启动子。特异性启动子只能在特定细胞表达，因此适合动物实验使用，乳腺蛋白基因就是一咱特异性启动子；诱导启动子需要加入特定的药物才能激发或者抑制其活性，如四环素诱导TRE表达；而表达系统中，运用最多的则是组成型启动子，这类启动子在绝大部分细胞里面都能维持一定的表达活性。当目的基因直接与乳腺蛋白基因重组时，重组蛋白的表达特异性将取决于重组基因前的启动子。

（3）通过显微注射法方法导入哺乳动物的受精卵，将受精卵体外培养至囊胚期时，可用分割针分割部分滋养层细胞进行性别鉴定，将雌性胚胎植入母体，以确保培育的转基因动物能分泌乳汁。

（4）将胚胎移植到同种的生理状态相同的受体中，发育，产仔，得到转基因动物。

例如，科学家将人抗凝血酶Ⅲ与山羊乳腺特异表达的基因进行整合，然后利用显微注射的方法将其转入山羊的受精卵中。整合有人抗凝血酶Ⅲ基因的受精卵，由代孕母羊孕育出生，待长成成年个体，其分泌的乳汁中就含有重组人抗凝血酶Ⅲ了，后续再经过多重加工工艺就能生产成药物了。

抗凝血酶Ⅲ在人体中主要由肝脏合成，存在于血浆中，是凝血酶的抑制剂，维持抗凝血平衡。患上抗凝血酶缺乏症的人，是静脉血栓栓塞的高危人群。有调查显示，约85%的抗凝血酶缺乏症患者，50岁之前至少发生一次血栓性疾病，也有相当一部分人患上血友病。抗凝血酶缺乏症的患者治疗时多要使用抗凝血酶浓缩剂，通常利用正常的人血浆制备，这需要成千上万的志愿者献血，同时还可能出现病原微生物感染。从人血液中提取的抗凝血酶既供不应求，又有安全隐患的问题，因此转基因山羊生产的重组人抗凝血酶Ⅲ就应运而生了。

2006年，美国GTC公司利用转基因山羊生产的重组人抗凝血酶Ⅲ药物在欧洲批准上市，成为世界首例成功上市的以转基因手段生产的药物，开启了转基因动物制药的新纪元。

例、利用转基因母牛乳腺生物反应器可生产蛛丝蛋白，获得转基因母牛的过程如图所示。

请回答下列问题：

（1）从雌牛的卵巢中采集的卵母细胞需要培养到??????期才能进行体外受精，体外受精前，需要对精子进行获能处理。当一个精子进入卵细胞后会激发卵子发生反应，如???????和??????等。

（2）在过程①中，蛛丝蛋白基因应与??????基因的启动子等调控组件重组在一起。在过程④前，需对囊胚的??????进行切割并做DNA分析进行性别鉴定，再选用雌性胚胎进行移植。

（3）从生理学基础角度看，胚胎移植能成功的原因有???????????????????????????????????????????????????(任意两点即可)。

答案：（1）MⅡ透明带反应卵细胞膜反应??（2）牛乳腺蛋白滋养层（3）①哺乳动物发情排卵后，不管是否妊娠，在一段时间内，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的；②早期胚胎在一定时间内处于游离状态，为胚胎的收集提供了可能；③受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应；④供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系

解析：(1)从雌牛的卵巢中采集的卵母细胞需要培育到MⅡ期才能进行体外受精