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实验一磺胺嘧啶一次性静脉给药后的药时曲线

【目的】磺胺嘧啶静脉一次性给药后其血药浓度随时间变化的规律。

【原理】已知磺胺嘧啶等磺胺类药物在酸性环境下其苯环上的氨基（—NH2）将被离子化而生成铵类化合物（—NH3+）。后者与亚硝酸钠反应可发生重氮化反应进而生成重氮盐（—N＝N+—）。该化合物在碱性条件下可与麝香草酚生成橙黄色化合物。在525nm波长下比色，其光密度与磺胺嘧啶的浓度成正比。具体反应过程为：

NH2NaNO

NH2

N N Cl

H3C OH

NHNaOH

N

H

CCl3COOHSO2NHR

+

SO2NHR

N

C

CH(CH3)2 3

ONaCH(CH3)2

根据上述原理,在给受试家兔一次静脉注射一定剂量的磺胺嘧啶后,于不同时间点采集其静脉血样,采用比色法对各样品中磺胺嘧啶的血药浓度进行定量分析,并以血药浓度对相应时间作图,从而获得磺胺嘧啶的静脉给药后的药时曲。

【动物】 3kg左右家兔一只

【药品】 20％磺胺嘧啶（sulfadiazine，SD）、7.5％三氯醋酸、0.1％SD标准液、0.5％亚硝酸钠、0.5％麝香草酚（用20％NaOH配制）、1000u/mL肝素生理盐水、3％戊巴比妥钠、蒸馏水。

【器材】 721分光光度计、离心机、磅秤、手术器械、动脉夹、尼龙插管（或玻璃插管、硅胶管）、兔手术台、注射器（5mL）及针头、移液器（0.01～1mL）、吸头、试管、离心管、试管架、玻璃记号笔、药棉、纱布、计算机。

【方法与步骤】

1．血中药物浓度测定：参见表1流程图。

麻醉：全麻或局麻均可。取兔一只（实验前禁食12小时不禁水），记录体重和性别，耳缘静脉注射3％戊巴比妥钠0.8～1.0mL/kg麻醉，仰位固定于兔手术台上。

手术：颈部手术区剪毛，切皮约6cm左右，钝性分离皮下组织和肌肉，气管插管，分离出颈总动脉约2～3cm左右，在其下穿两根细线，结扎远心端，保留近心端。

耳缘静脉注射1000u/mL肝素1mL/kg。

插管：用动脉夹夹住动脉近心端，再于两线中间的一段动脉上剪一“V”型切口，

插入尼龙管，用线结扎牢固，以备取血用。

取血：打开动脉夹放取空白血样0.4mL，分别放入1号管（空白管）和2号管（标准管）各0.2mL摇匀静置。而后静注20％SD1.5mL/kg，分别于注射后1、3、5、15、30、45、60、90，120分钟时由动脉取血0.2mL加到含有7.5％三氯醋酸2.7mL的试管中摇匀。标准管加入0.1％SD标准液0.1mL，其余各管加蒸馏水0.1mL摇匀。

（6）显色：将上述各管离心5分钟（1500-2000转/分），取上清液1.5mL，加0.5％亚硝酸钠0.5mL，摇匀后，再加入0.5％麝香草酚1mL后溶液为橙色。

测定：于分光光度计在525nm波长下测定各样品管的光密度值。

表1

磺胺类药物血药浓度测定的步骤

7.5％

0.5％

0.5％

时间

血液

蒸馏水

浓度

试管

三氯醋酸

亚硝酸钠

麝香草酚

光密度

（min）

（mL）

（mL）

μg/mL

（mL）

（mL）

（mL）

空白管

0

2.7

0.2

0.1 0.5

1

0

标准液

标准管

0

2.7

0.2

0.1

充分摇

0.5

1

16.7

匀后离

给药后

1

2.7

0.2

0.1

0.5

1

心5分，

充分

3

2.7

0.2

0.1

0.5

1

取上清

摇匀

5

2.7

0.2

0.1

0.5

1

液1.5

15

2.7

0.2

0.1

0.5

1

mL

30

2.7

0.2

0.1

0.5

1

45

2.7

0.2

0.1

0.5

1

60

2.7

0.2

0.1

0.5

1

90

2.7

0.2

0.1

0.5

1

120

2.7

0.2

0.1

0.5

1

计算血中药物浓度：根据同一种溶液浓度与光密度成正比的原理，通过空白血标准管浓度及其光密度值推算出样品管的磺胺药物浓度。公式如下：

样品管光密度(OD)

=样品管浓度(μg/mL)

标准管光密度(OD’) 标准管浓度(μg/mL)

= 样品管光密度(OD)×标准管浓度

样品管浓度(μg/mL)

标准管光密度(OD’)

血药浓度(μg/mL)=样品管浓度×稀释倍数（30）

【结果与处理】 将所得数据填入表1中，并用计算机软件绘制药物的药时曲线。

【注意事项】

每次取血前要先将插管中的残血放掉。

每吸取一个血样时，必须更换吸量管，若只用一支吸量管时必须将其中的残液用生理盐水冲净。

将血样加到三氯醋酸试管中应立即摇匀，否则易出现血凝块。