病毒的鸡胚培养法.ppt

关于病毒的鸡胚培养法（一）实验目的1.了解鸡胚培养有哪几种常用的接种方法。2.掌握鸡胚尿囊腔接种培养鸡新城疫病毒的操作技术。第2页,共17页，2024年2月25日，星期天（二）实验原理实验室培养病毒常使用动物接种和鸡胚培养两种方法，而鸡胚培养更为常见。一般而言，禽病毒病大部分可经鸡胚分离病毒，其他动物病如犬瘟热也可经鸡胚分离病毒。第3页,共17页，2024年2月25日，星期天鸡胚接种技术是养禽业中一种相对新的疫苗接种方法。这种方法就是对孵化后期的鸡胚接种某些活的病毒疫苗。这些病毒疫苗不会对孵化率产生不利的影响，通过这种方式接种疫苗后孵出的雏鸡具有免疫保护力。第4页,共17页，2024年2月25日，星期天（三）实验器材1.鸡胚：要选择SPF鸡胚或低母源抗体的鸡胚。从实践看，法氏囊炎病毒对抗体相当敏感，所以要用无母源抗体的鸡胚；而新城疫病毒、禽流感病毒等可抵御母源抗体的作用而得以繁殖致死鸡胚。孵化前的鸡胚应注意消毒，置37-38℃、相对湿度45-60%的孵卵器中孵育，每日翻蛋数次，孵蛋第4天开始照蛋，弃去无精蛋和死胚。多采用9-11日龄的活胚接种。第5页,共17页，2024年2月25日，星期天（四）实验方法1.接种前的准备：a.鸡胚的准备：选择9-11日龄的鸡胚，在照蛋时以记号笔勾出气室，于气室稍下方胚胎活跃而血管明显的区域中，在血管之间的间隙划上记号，作为接种部位。用3%碘酊对接种部位进行消毒，再用75%酒精棉球擦一遍，在接种定位处打孔，气室向上竖放于蛋托上。第6页,共17页，2024年2月25日，星期天鸡胚的模式结构1.卵壳2.绒毛尿囊膜3.尿囊腔4.羊水腔5.卵黄囊6.鸡胚胎7.卵白第7页,共17页，2024年2月25日，星期天b.病毒材料的准备：要分离培养的病毒材料应是无菌的，因此在处理材料的过程中，应严格按照无菌操作进行，将新城疫弱毒活疫苗按照每1000羽份配成250ml,为达到无菌的目的，可在每毫升接种物中加入青霉素和链霉素各100-5000IU，置室温中1h处理。第8页,共17页，2024年2月25日，星期天法氏囊病毒的分离取疑似感染病毒的法氏囊，称重，按1:5（w/v）加入生理盐水，研磨，-20℃，反复冻融2次；每次冷冻时间以研磨物结冰为准；将冻融物转入离心管中，3000转/分，离心5分钟，将上清取出，使用无菌滤器过滤第9页,共17页，2024年2月25日，星期天2.接种鸡胚接种的方法有几种：绒毛尿囊腔内接种★★绒毛尿囊膜接种羊膜腔接种卵黄囊内接种第10页,共17页，2024年2月25日，星期天取10-12日龄的鸡胚，照蛋选择血管较少的部位做一记号，用磨蛋器磨一于纵轴平行的裂痕，小心挑开蛋壳，将白色的壳膜用针尖小心挑破，不要伤及血管丰富而透明的绒毛尿囊膜，在气室顶端钻一小孔，用滴管贴近小孔，轻轻一吸，绒毛尿囊膜便下陷成一小凹。绒毛尿囊膜接种绒毛尿囊膜接种1.鸡胚胎2.羊膜腔3.绒毛尿囊膜第11页,共17页，2024年2月25日，星期天取10-12日龄的鸡胚，消毒气室顶上的蛋壳，并将气室顶端的蛋壳锉一三角形的裂痕，用灭菌镊子揭去裂痕部位的蛋壳和壳膜，用灭菌平头镊子刺破尿囊膜，并轻轻夹去羊膜，用小号针头刺进羊膜腔内，注入0.05-0.1ml的病毒接种液，以氧化锌胶布封口，滴上溶化的固体石蜡。放回孵化器，使蛋直立孵化。羊膜腔接种羊膜腔接种1.鸡胚胎2.羊膜腔3.绒毛尿囊膜4.羊膜第12页,共17页，2024年2月25日，星期天选择6-8日龄的鸡胚，照蛋检查，划出气室和胎位，并以气室向上竖立在蛋托上，气室端的蛋壳经消毒后以打孔器钻一小孔，将注射针头刺过小孔，沿着卵的纵轴刺入约3cm，然后注入0.2ml的病毒接种液，用氧化锌胶布及石蜡封口后放回孵化器中培养。卵黄囊内接种卵黄囊接种第13页,共17页，2024年2月25日，星期天鸡胚的各种接种途径1.绒毛尿囊膜接种2.尿囊腔接种3.羊水腔接种4.卵黄囊接种第14页,共17页，2024年2月25日，星期天绒毛尿囊腔内接种★★绒毛尿囊膜接种羊膜腔接种卵黄囊内接种3.收毒：病毒的收毒根据接种的途径而定。尿囊液绒毛尿囊膜羊水卵黄液和卵黄膜第15页,共17页，2024年2月25日，星期天4.废料处理操作完毕，将所有的用具煮沸消毒，擦净后再以消毒水浸洗，卵壳、壳膜和胚胎等残物煮沸消毒后弃去。第16页,共17页，2024年2月25日，星期天*感谢大家观看第17页,共17页，2024年2月25日，星期天