病理组织切片技术.pptVIP

六、贴片、烤片第64页,共81页，2024年2月25日，星期天贴片、烘片待切片在恒温水面上充分展平后，将蜡片捞到载玻片的中段处倾去载玻片上的余水，置入60～65℃恒温箱内或切片漂烘温控仪的烘箱内烤片15～30分钟，脱去溶化组织间隙的石蜡。第65页,共81页，2024年2月25日，星期天烤片机第66页,共81页，2024年2月25日，星期天七、染色第67页,共81页，2024年2月25日，星期天染色

定义用染液对组织切片进行处理，使组织中的不同成分被染上相应的颜色，产生不同的折射率，以利于显微镜观察和分析的方法。第68页,共81页，2024年2月25日，星期天常用的染色方法苏木素-伊红（Hematoxylin-Eosin）染色法简称H.E染色法。这种方法对任何固定液固定的组织和应用各种包埋法的切片均可使用。第69页,共81页，2024年2月25日，星期天苏木素是一种碱性染料,可使组织中的嗜碱性物质染成蓝色，如细胞核中的染色质等；伊红是一种酸性染料，可使组织中的嗜酸性物质染成红色，如多数细胞的胞质、核仁等在H.E染色的切片中均呈红色。第70页,共81页，2024年2月25日，星期天H.E染色程序如下脱蜡脱苯复水染色脱水透明封固第71页,共81页，2024年2月25日，星期天切片脱水透明要彻底ＨＥ染色后，要彻底脱水透明，才能进行树胶封盖，成为永久标本。如果脱水透明不彻底，封片后呈白色雾状，镜下模糊不清，过一段时间染片就褪色。脱水要经过多次无水乙醇，也可使用石炭酸二甲苯进行脱水。如采用后者，染片要经过多次二甲苯以除去石炭酸。第72页,共81页，2024年2月25日，星期天注意切片在染色前必须脱蜡干净：未完全脱蜡的组织切片，染色后组织和细胞模糊不清。脱蜡要用两级或三级脱蜡剂如二甲苯，时间为10~20分钟，应视所用二甲苯的新旧以及室温情况而定。脱蜡时间宁可长些，不应过短第73页,共81页，2024年2月25日，星期天一张高质量的HE切片要求???1.切片完整、贴片恰当???2.切片较薄而均匀???3.无皱折???4.无刀痕???5.染色清晰、核浆分明、透明度好???6.无固缩、龟裂、污染???7.封胶适当、玻片清洁???8.字体端正、号码清楚第74页,共81页，2024年2月25日，星期天第75页,共81页，2024年2月25日，星期天第76页,共81页，2024年2月25日，星期天第77页,共81页，2024年2月25日，星期天切片完全干涸，会使组织收缩、割裂，形成所谓”龟裂”现象。也会使部分细胞核透明不良，看起来像黑色的细胞核。???完成染色后，每张片子要在显微镜下观察，检查制片过程中有没有发生差错。第78页,共81页，2024年2月25日，星期天八、封片第79页,共81页，2024年2月25日，星期天封片注意事项所用树胶浓度要适中树胶用量多少应根据组织大小、厚薄而定应迅速敏捷滴胶封片时，切片上应保留适当的二甲苯，以防干封，产生气泡。为防止气泡，封片时，树胶不宜搅动。如遇有小泡时可用镊子轻压盖玻片，排除气泡。第80页,共81页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第81页,共81页，2024年2月25日，星期天透明

目的透明是制片过程中很重要的环节。大多数脱水剂不能和包埋剂（如石蜡）混溶，而透明剂即可与脱水剂混溶，又能和包埋剂（如石蜡）混溶，能起到桥梁作用。第32页,共81页，2024年2月25日，星期天常用的透明剂苯甲苯二甲苯（最常用的透明剂）三氯甲烷汽油香柏油冬青油松油醇第33页,共81页，2024年2月25日，星期天常用的透明

方法将脱水后的组织块先用乙醇-二甲苯混合液处理或直接浸入透明剂中，置换透明剂2~3次即能达到目的。透明的时间的长短取决于标本的种类和组织块的厚薄，一般活检标本透明15~20min即可。第34页,共81页，2024年2月25日，星期天四、浸蜡、包埋第35页,共81页，2024年2月25日，星期天浸蜡

定义经过透明的组织块在溶化的石蜡中浸渍，使组织中的透明剂被完全置换出来的过程第36页,共81页，2024年2月25日，星期天浸蜡的

目的使石蜡浸入组织中，取代组织中含有的透明剂。第37页,共81页，2024年2月25日，星期天浸蜡的

种类石蜡明胶火棉胶树脂碳蜡又是包埋剂。既是透明剂，第38页