DNA提取方法和试剂作用详解11 - 化学工业.docx

DS能更好地直接作用于其细胞壁，细胞内的DNA释放完全，提高了总DNA的得率。通过提取获得的DNA有于细胞或组织匀浆

DS能更好地直接作用于其细胞壁，细胞内的DNA释放完全，提高了总DNA的得率。通过提取获得的DNA有

于细胞或组织匀浆,可迅速溶解细胞膜、核膜，而且蛋白质与其结合后即失去对DNA的结合,进一步的纯化可采

与土壤颗粒分开再进行提取的方法，利用PCR技术以及杂交技术检测不同方法获得DNA的种类和纯度，发现前

直接从生物材料中提取DNA.由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合，因为阴离子去污剂能

1试剂的作用

氯仿的作用？

氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层.

最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。(酚易溶于氯仿中）

用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么?

异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡.异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。

用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子?

用乙醇沉淀DNA时,通常要在溶液中加入单价的阳离子,如NaCl或NaAc，Na+中和DNA分子上的

负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,而易于聚集沉淀.

2DNA提取分为三个基本步骤

每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不同而有区别。。细胞的破碎

细菌有坚硬的细胞壁,首先要破碎经胞.方法有三种；①机械方法：超声波处理法、研磨法、匀浆法;②化学试剂法：用SDS处理细胞;③酶解法：加入溶菌酶或蜗牛酶，都可使细胞壁破碎。利用研磨或者超声破碎细胞，并通过加入去污剂以除掉膜脂。

时，所需样品量少，适用于濒危植物DNA的提取。2.5果胶酶法Steven等［2s采用果胶酶对植物细胞l或NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,而易于聚集沉淀.2方法和试剂作用详解2.4高盐低pH法该法中所用的提纯试剂仅为无机盐和异丙醇。通常采用的无机盐为醋酸钾

时，所需样品量少，适用于濒危植物DNA的提取。2.5果胶酶法Steven等［2s采用果胶酶对植物细胞

l或NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,而易于聚集沉淀.2

方法和试剂作用详解2.4高盐低pH法该法中所用的提纯试剂仅为无机盐和异丙醇。通常采用的无机盐为醋酸钾

解释土壤微生物生态系统中的基因的多样性及其随环境的变化。从土壤中提取和纯化DNA是最关键的技术之一。

DNA在冷乙醇或异丙醇中沉淀，因为DNA在醇中不可溶而黏在一起,这一步也能除掉盐分。另外，目前也有利用吸附过柱的方法提取DNA的商业化试剂盒。

DNA提取的几种方法

(1）。浓盐法

A.利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M氯纳抽提，得到的DNA粘液与含有少量蛋白质氯仿一起摇荡,使乳化，再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍体积95％乙醇可将DNA钠盐沉淀出来.B。也可用0.15MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNA，再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白，再按氯仿-—-异醇法除去蛋白。

两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些。

C.以稀盐酸溶液提取DNA时,加入适量去污剂，如SDS可有助于蛋白质与DNA的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂。通常用。15MNaCL，0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA。(2）.阴离子去污剂法；用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA.由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合，因为阴离子去污剂能够破坏这种价键，所以常用阴离子去污剂提取DNA

（3）.苯酚抽提法：苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA的水相，利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA。此时DNA是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态

理盐水洗去血污，剪取约0.5g组织，放入1.5ml离心管中，剪碎。2．加入0。