作品PPT-探索新冠的慧眼-PCR技术.ppt

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PCR探索新冠的慧眼—PCR技术黄艳玲天津现代职业技术学院

属于β属的冠状病毒,有包膜颗粒呈圆形或椭圆形,常为多形性直径60~140nm,遗传物质为单链核糖核酸冠状病毒四周有放射状的突起,类似盔甲上的刺,形如日冕,具有一种“死亡美感”。

病原学方法PCR检测病毒核酸PCR是聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction)的简称。是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA片段,可看作生物体外的特殊DNA复制。简单的来说就是体外简化条件下模拟DNA体内复制快速扩增的方法

核酸:是一类由核苷酸(nucleotide)构成的生物大分子,分为核糖核酸(ribonucleicacid,RNA)和脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid,DNA)两类其中RNA多为单链结构,DNA多为双链结构

核酸检测核酸电泳、核酸杂交聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)基因芯片、基因测序

PCR-技术应用:遗传性疾病的基因诊断、传染病的诊断、癌基因检测、法医学上的亲子鉴定、DNA测序、基因克隆等

PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,延伸温度之间很好地进行控制。

PCR一般会经历多轮温度循环,其中每一轮温度循环包括变性(denaturation)、退火(anealing)和延伸(elongation)三步变性是在高温(95℃左右)条件下,DNA模板双链打开的过程,使之能够与引物结合,为下面的反应做准备退火是在冷却后(一般在68℃左右),变性后的DNA单链与引物通过碱基互补配对(A-T、C-G),再次形成局部双链延伸是在DNA单链模板与引物特异性结合(俗称“接头”)之后,于72℃左右的温度下TaqDNA聚合酶发生作用

PCR反应的组成成分(体内DNA复制条件)包括检测模板(DNAtemplate)、引物(primer)、Taq酶、原料(脱氧核糖核酸)dNTP、缓冲液(buffer)

荧光PCR(RT-PCR)经典PCR中DNA模板的扩增遵循指数增长规律,但受限于实际反应条件,经过多轮循环后,PCR反应将进入“平台期”而产生偏离。对经典PCR终点的DNA模板进行检测,本质上仍是一种定性或半定量检测,可以用于判断待测核酸模板是否存在、以及相对含量多少。

影响检测结果:受待测样品来源、以及技术本身的限制,也不可避免地存在。

PCRTHANKYOU!

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