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WehelpyoudiscoverlifeCyagenBiosciencesInc.原代细胞培养——Lisa
主要内容原代细胞的取材原代细胞的解离原代细胞的消化原代细胞的培养原代细胞培养的注意事项CyagenBiosciencesInc.Wehelpyoudiscoverlife
原代细胞定义：原代培养也叫初代培养，是从供体取得组织细胞后在体外进行的首次培养。原代培养是建立各种细胞系的第一步，是从事组织培养工作人员应熟悉和掌握的最基本的技术。原代培养的细胞具有很多特点，首先组织和细胞刚刚离体。生物学特性未发生很大变化，仍具有二倍体遗传特性，最接近和反应体内生长特性，很适合做药物测试、细胞分化等试验研究。CyagenBiosciencesInc.Wehelpyoudiscoverlife
原代细胞的取材人和动物细胞的取材时原代细胞培养陈公公的首要条件，是进行细胞培养的第一步，若取材不但，将会直接影响细胞的体外培养原代细胞的取材、解离与培养CyagenBiosciencesInc.Wehelpyoudiscoverlife
注意事项(1)无菌操作：细菌或霉菌污染是培养失败的常见原因，必须加强各个环节的无菌操作观念，以预防为主，一旦污染，一般很难消除。(2)培养液：所用的培养液必须满足细胞生存和生长的必要条件。由于细胞来源的动物种类、组织类型不同，对培养液的要求有一定的差异，必要时可用预实验的方法选择适当的培养液。(3)小牛血清：小牛血清对于维持培养细胞的生存和促进细胞增殖起着关键性作用。可选择多种不同批号的小牛血清进行小样分析。一旦确定某一厂家的某一批号小牛血清后，就保持应用至实验完成。(4)胶原酶溶液：必须新鲜配制，贮存时间过长(即使是-20℃低温保存)，也将影响消化效力，导致消化时间过长，细胞损伤增加。CyagenBiosciencesInc.Wehelpyoudiscoverlife
(5)L-谷氨酰胺：几乎所有细胞对谷氨酰胺都有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞会因生长不良而死亡。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，加有谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱贮存两周以上时，就应重新加入原来量的谷氨酰胺。(6)静置培养：原代细胞在消化分离后，置于CO2培养箱的头24～48h(必要时72h)内，应处于绝对静置状态，切忌不时地取出培养瓶观察生长状况，这将使原代分离细胞难以贴壁，更谈不上伸展和增殖，初学者尤应注意。不必担心培养液中的营养成分会消耗光，在细胞增殖之前对营养的要求并不大。原代培养初期仅加一薄层培养液的目的也在于有利于细胞贴壁伸展。(7)消化时间：一般消化至肉眼尚可见微小组织颗粒即可，因为此时组织颗粒已经松散，略经吹打即成细胞团或单个细胞，过久的消化往往导致细胞损伤加重，细胞培养成活率降低。(8)其他生长因子：经过以上处理，一般原代分离细胞培养均可以成功。对于少数特殊类型细胞也可以考虑加一些特殊的生长因子，如胰岛素能促使细胞摄取葡萄糖和氨基酸。另外，内毒素、EGF、FGF等均有促有丝分裂作用，但费用较高。CyagenBiosciencesInc.Wehelpyoudiscoverlife
谢谢CyagenBiosciencesInc.Wehelpyoudiscoverlife
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