马钱子散中马钱子的含量测定.docx

实训二十三 马钱子散中马钱子的含量测定

一、 实训目的

掌握薄层扫描法的一般操作步骤和技能

理解外标一点法测定马钱子含量的原理

了解薄层扫描法含量测定的设计思路。

二、 测定依据

马钱子散药品标准［《中国药典》2005年版（一部）正文部分359页］

【处方】马钱子（砂烫）适量（含士的宁8.0g）地龙（焙黄）93.5g

【含量测定】取装量差异项下的本品约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加三氯甲烷20ml与浓氨试液1ml，轻轻摇匀，称重，于室温下放置24小时，再称重，补足三氯甲烷减失的重量，充分振摇，滤过，滤液作为供试品溶液。另取士的宁对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录IVB）试验，吸取供试品溶液8^1和对照品溶液4日1，交叉点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯一丙酮一乙醇一浓氨试液（16：12：1：4）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。照薄层色谱法（附录VB薄层色谱扫描法）进行扫描，波长：气=257nm，人r=300nm，测量供试品吸光度积分值与对照品吸光度积分值，计算，即得。

本品按干燥品计算，每袋含马钱子以士的宁（CHNO）计，应为7.2?8.8mg。212222

薄层色谱法［《中国药典》2005年版（一部）附录VB］

三、 测定原理

本品系由马钱子（砂烫）和地龙（焙黄）制成的散剂，具祛风湿、通经络之功效，内服可治疗关节疼痛、臂痛腰痛、肢体肌肉萎缩等症。由于马钱子为本品主药，其中所含士的宁既是有效成分又是毒性成分，故药品标准以士的宁为指标，采用薄层扫描外标一点法对马钱子含量进行测定，并规定了严格的含量限度，以保证用药的安全性和有效性。

士的宁为吲哚类生物碱（图5-37），具有碱性，溶于三氯甲烷、苯、甲醇、乙醇，难溶于水。因此样品前处理时，采用三氯甲烷-浓氨试液浸渍提取，加入少量浓氨试液的目的在于碱化样品中的士的宁，使其转变成游离态生物碱，进而溶于三氯甲烷被提取出来。此外，在展开剂中加入一定比例浓氨试液是使展开剂微呈碱性，以便克服硅胶的弱酸性，抑制士的宁的解离，使其斑点集中清晰。

士的宁结构中具有共轭体系，在紫外光区有吸收，254nm处呈现最大吸收，但无荧光性质，因此在薄层色谱试验中采用荧光淬灭法进行显色和定位，即将展开后的硅胶GF4薄层板置荧光灯下，用254nm紫外光照射，薄层板中荧光物质发出黄绿色荧光，在此背景上，士的宁所在位置呈现暗蓝褐色斑点。

图5-37士的宁结构式

测定原理：在碱性条件下，用三氯甲烷将士的宁从样品中提取出来，经薄层色谱分离得到其斑点，通过随行展开的对照品士的宁进行定位。然后分别对供试品和对照品士的宁斑点进行扫描，测定相应的吸光度积分值。根据外标一点法直线方程，建立供试品士的宁浓度公式，将测得的供试品、对照品吸光度积分值以及对照品浓度代入其中，即可计算出士的宁含量。

四、 仪器与试剂

薄层扫描仪、分析天平（感量0.0001g、0.00001g）、具塞锥形瓶、移液管、硅胶GF4薄层板、展开缸、点样器（微升毛细管或微量注射器）、荧光灯等。

士的宁对照品、三氯甲烷、甲苯一丙酮一乙醇一浓氨试液（16：12：1：4上层）等。

五、 实验步骤与内容

供试品溶液的制备在50ml具塞锥形瓶中，用分析天平（感量0.0001g）精密称定装量差异项下的本品约0.5g，称量范围0.4500g?0.5500g，记录所称重量。用移液管精密加三氯甲烷20ml与浓氨试液1ml，密塞，轻轻摇匀，分析天平（感量0.0001g）称重，保留四位有效数字并记录重量，于室温下放置24小时，其间不时振摇。再用分析天平（感量0.0001g）称重，用吸管小心滴加三氯甲烷补足减失的重量，充分振摇，常压过滤，弃去初滤液，收集续滤液作为供

试品溶液。

对照品溶液的制备在10ml量瓶中，用分析天平（感量0.00001g）精密称定士的宁对照品10mg，称量范围0.00950g?0.01050g，记录所称重量。加三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含0.95?1.05mg的溶液，作为对照品溶液。

测定法照薄层色谱法（附录IVB）试验，用微升毛细管或微量注射器吸取供试品溶液8pl和对照品溶液4日1，按外标两点法点样要求，分别交叉点于

同一硅胶GF254薄层板上，形成至少6个原点，原点间距不得小于8mm，故应选用15cmX20cm规格的薄层板。以甲苯一丙酮一乙醇一浓氨试液（16：12：1：4）的上层溶液为展开剂，展开10cm左右，展开前要充分“饱和”30分钟。展开完毕，取出薄层板，晾干至无展开剂气味。置荧光灯下，254nm紫外线照射，根据对照品斑点位