“磁力架结合枪头移液法”核酸提取仪在避免交叉污染上的优势(文库版).docxVIP

“磁力架结合枪头移液法”核酸提取仪在避免交叉污染上的优势

为了提高实验效率以及节省人力，越来越多的实验室选择使用自动化核酸提取仪进行大批量的DNA/RNA提取实验。自动化核酸提取仪利用硅基质磁珠与核酸的特异性结合来实现核酸的纯化。目前市面上最主流的核酸提取仪是基于磁棒法的原理，这种方法主要是利用一个磁力棒转移磁珠来完成核酸的提取（图1）。

图1磁棒法核酸提取仪提取原理

使用这种方法的仪器在提取效率上确实相对手工提取有很大的提升。但是由于在提取过程中，带有浸泡在液体过后的磁棒回在整个试剂板上方移动，如果此时残留在磁棒上的液体滴下，会有交叉污染的风险。

另外，这种方法基本都采用磁棒套震荡混匀方式，高频率震荡过程中虽然有助于样品的裂解，但容易产生较多气溶胶，含有样品的液滴核分散在空气中能漂浮较长时间，会有较高的交叉污染的风险。

交叉污染的风险对疾病检测的阴阳性结果判断会产生干扰，对一些检测实验室尤其是疾病监控和控制单位的影响是很大的。

为了改善自动化核酸提取在交叉污染上的问题，一些厂商抛弃了传统的磁棒法，使用磁力架结合枪头移液法来设计核酸提取仪来完成提取，原理见图2：

图2枪头移液法核酸提取仪提取原理

这种采用磁力架结合枪头移液的方法针对消除交叉污染的优化主要体现在下面几个方面：

每个样本独立轨道，间距大于污染影响范围

磁力架结合枪头移液的自动化核酸提取仪在提取样本核酸时，每个样本都有独立的操作空间，仪器会在单独的轨道上运动。每个样本操作空间的间距足够大且不与其他样本的操作空间交叉，摒除了在提取过程中交叉污染的可能性。如下图所示，各列样本侧操作间距为25mm，足以避免交叉污染的发生。

封闭的试剂槽，只留小开口，不会由于误操作导致互相污染。

磁力架结合枪头移液的自动化核酸提取仪配套了全套的预装试剂，基本可以覆盖市场上的全部需求。

如下图所示，预装的试剂使用了锡箔纸封装，使用时机器会自动在每一孔试剂上戳破一个小孔。

枪头前端细长，使枪头与试剂的接触面尽可能少，而且磁珠、样品及试剂的转移，全部在枪头耗材内部进行。如下图所示

这些独特的设计理念，保证了在整个提取过程中，提取试剂一直存在与一个相对封闭的环境内，大大降低了污染的可能性。

内置UV灯

每次提取完成后可进行彻底的UV消毒，进一步降低不同批样本间互相污染的几率。

下面是磁力架结合枪头移液的自动化核酸提取仪的交叉污染测试实验数据：

实验1

提取样本：200ul人类血清样本(1x104IU/ml)ddH2O）

洗脱体积：60ul

实验方法：在核酸提取仪的16个位置分别提取V、H两种类型的样本：

V-以200ul含HCV(1x104IU/ml)的血清上机进行提取。

H-以200ulddH2O上机进行提取。

V组与H组排放顺序如下：

Slot

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

Sample

H

V

H

H

H

V

H

H

H

V

H

H

H

V

H

H

提取后将得到的核酸利用qPCR的方法检测，结果显示V组的样本均有起峰，而H组的样本均没有，证明了没有交叉污染产生。

Colour

Name

Ct

1

-

2V

30

3

-

4

-

5

-

6V

32.03

7

-

8

-

9

-

10V

30.97

11

-

12

-

13

-

14V

29.86

15

-

16

-

N

-

N

-

实验2

提取样本：200ul人类全血样本

洗脱体积：100ul

实验方法：在核酸提取仪的16个位置分别提取B、H两种类型的样本：

B-以200ul全血上机进行提取。

H-以200ulddH2O上机进行提取。

B组与H组排放顺序如下：

Slot

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

Sample

B1

H1

B2

H2

B3

H3

B4

H4

B5

H5

B6

H6

B7

H7

B8

H8

NanoDrop测值浓度结果：（OH为直接测量ddH2O的结果）

SampleID

ng/ul

260/280

260/230

A260

A280

230

340raw

B1

61

1.9

1.8

1.221

0.644

0.679

0.037

B2

64

1.91

1.6

1.28

0.671

0.8

0.069

B3

63.4

1.87

1.49

1.268

0.678

0.853

0.046

B4

57

1.87

1.74

1.14

0.61

0.657

0.067

B5

58.2

1.92

1.72

1.163

0.605

0.678

0.062

B6

61.1

1.9

1.58

1.222

0.643

0.773

0.12

B7

46.6

1.91

1.81

0.932

0.4