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2024-04-21 发布于江苏
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基于蟾蜍分泌腺转录组对蟾蜍二烯酸内酯合成途径关键基因的挖掘.docx

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·258·中草药2024年1月第55卷第1期ChineseTraditionalandHerbalDrugs2024JanuaryVol.55No.1

基于蟾蜍分泌腺转录组对蟾蜍二烯酸内酯合成途径关键基因的挖掘

张灵迂，王普庆，周罗静，高继海，侯飞侠*

成都中医药大学药学院西南特色中药资源国家重点实验室，四川成都611137

摘要：目的挖掘蟾蜍二烯酸内酯（bufadienolides，BDs）生物合成途径的关键基因。方法使用激光捕获显微切割技术捕获中华大蟾蜍分泌腺[耳后浆液腺（CE）、皮肤浆液腺（CK）和皮肤粘液腺（CN）]为实验材料，在DNBseq测序平台进行转录组测序，并进行生信分析及对转录组结果进行验证。结果共得到63.01Gb原始数据和4550个差异基因，其中CE和CK共有上调差异基因880个，其GO和KEGG富集显示主要在甾类激素生物合成、胆汁酸合成和C21类固醇生物合成等功能；CN上调差异基因主要富集在蛋白质糖基化、细胞黏结、体液免疫应答等功能。在CE、CK组上调的差异基因富集结果中发现有28种与BDs合成相关的物质的代谢、合成及运输等功能，且参与调控的基因有94个。对上述基因进行蛋白互作网络分析（protein-proteininteractionnetwork，PPI）分析，结果显示，94个基因中有34个存在互作关系，其中基因AMACR、HSD17B4、SCP2及ACOT8参与调控胆汁酸合成，基因LOC122926609参与调控石胆酸结合，结合文献分析，作者认为初级胆汁酸合成途径是BDs合成的下游途径，石胆酸可能是BDs类成分的重要前体。进一步将存在互作关系的基因关联到表达量矩阵中，结果显示大部分基因在样品CE和CK组中的表达量均大于CN组，且上述5个基因的表达趋势一致（CE、CK＞CN），认为这几个基因是调控BDs的下游合成途径的关键基因。在上述基础上选取9个与BDs合成相关的基因进行qRT-PCR分析，结果与转录组测序基因表达趋势一致，认为该结果具有准确性。结论完成了中华大蟾蜍分泌腺的转录组研究，推测出BDs下游合成途径的关键基因，为蟾毒内酯类化合物的生物合成途径研究提供了丰富的参考数据，也为深入研究该类化合物生物合成的分子机制奠定了基础。

关键词：中华大蟾蜍；分泌腺；蟾蜍二烯酸内酯；下游途径；关键基因

中图分类号：R286.12文献标志码：A文章编号：0253-2670(2024)01-0258-11

DOI:10.7501/j.issn.0253-2670.2024.01.026

MiningkeygenesofBDssynthesispathwaybasedonthetranscriptomeofBufobufogargarizanssecretiongland

ZHANGLingyu,WANGPuqing,ZHOULuojing,GAOJihai,HOUFeixia

StateKeyLaboratoryofSouthwesternChineseMedicineResources,SchoolofPharmacy,ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine,Chengdu611137,China

Abstract:ObjectiveToexplorethekeygenesofbufadienolides(BDs)biosynthesispathway.MethodsThesecretoryglandsofBufobufogargarizans[retroauricularserousglands(CE),dermalserousglands(CK)anddermalmucousglands(CN)]werecapturedbylasercapturemicrodissectiontechnologyasexperimentalmaterials.Transcriptomesequencingandbiogeni