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培养基适用性检查

验证报告

文件编号：VMP-VV-501REP-00

起草人：

审核人：

批准人：

批准日期：年月日

1.概述

通过验证以确认所采用的培养基适合于细菌、霉菌及酵母菌的测定及控制菌的检查，根据特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。假设符合，按验证的方法和条件进行微生物限度检查；假设不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。

2.验证目的及范围

为了确认所采用细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查的培养基是否符合微生物限度检查法的规定要求，以保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。

3.验证风险评估

对于本次验证的执行进行了如下的风险分析：

严重程度

S

可能性

P

可检测

D

风险优先级RPN=S×P×D

1

低

1

低

1

高

RPN≤7

低

可以接受，无需采取措施

2

中

2

中

2

中

16≥RPN≥8

中

一定程度上接受，但应按风险优先级

采取措施尽可能降低

3

高

3

高

3

低

RPN＞16或严重程度＝4

高

不能接受，尽快采取措施降低

4

关键

4

极高

4

极低

步骤/单元

危害

S

可能原因/

程序失败

P

现行控制

D

R

P

N

需采取措施

S

P

D

R

P

N

培训

验证局部工程出现偏差或漂移

3

方案培训不到位，方案的执行者不熟悉方案内容

2

严格执行经批准的验证报告进行培训，并考核合格

3

18

确认按照批准的方案培训，培训者均熟练掌握所培训内容。

1

1

2

2

检验过程操作不当

未到达设定标准，验证失败。

3

未遵循培养基适用性检查检查操作规程，未严格遵循方案规定方法。

2

制定培养基适用性检查检查操作规程，并对规程及设立的验证方法培训，按规程及方案要求进行操作。

3

18

确认培养基适用性检查检查操作规程已制定并批准，确认人员已培训；确认操作规程适用性。

1

1

2

2

4.验证前准备

4.1验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后〔且在验证实施前〕对本次验证相关人员进行培训。培训人员记录见附件1。

4.2将所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。

4.3仪器与器具：恒温培养箱、生化培养箱、高压蒸汽灭菌器、净化工作台、无菌培养皿、无菌移液管。

5.验证内容

5.1测试环境条件要求

所有检查在环境洁净度C级下的局部A级洁净度的单向流空气区域内隔离系统内进行，其全过程严格遵守无菌操作，能防止微生物污染。

5.2计数培养基

验证用菌种及培养基：

来源：食品药品检验所

5.2.1.2菌落计数用菌种

菌种名称

内控编号

大肠埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC〔B〕44102]

E-

金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC〔B〕26003]

S-

枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)[CMCC〔B〕63501]

B-

白色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001]

C-

黑曲霉(Aspergillusniger)[CMCC(F)98003]

A-

注：编号由菌种首字母-传代代数-配制日期组成。

培养基及其制备方法：取市售的脱水培养基，分别按照规定方法进行配制后灌装于洁净的三角烧瓶中，然后加塞灭菌，在实验前加温熔化备用。

培养基名称

培养基批号

配制日期

有效期至

营养琼脂培养基

玫瑰红钠琼脂培养基

营养琼脂对照培养基

玫瑰红钠琼脂对照培养基

5.2.3菌液制备

5.2.3.1接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10ml营养肉汤培养基中，30～35℃培养18～24小时，取此培养液1ml，加0.9％无菌氯化钠溶液至10ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-6～10-7，使菌数约为50～100cfu/ml，做活菌计数备用。

5.2.3.2接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml改进马丁培养基中，23～28℃培养24～48小时，取此培养液1ml，加0.9％无菌氯化钠溶液至10ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-6～10-7，使菌数约为50～100cfu/ml，做活菌计数备用。

5.2.3.3接种黑曲霉的新鲜培养物至改进马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天的用3～5ml含0.05%〔ml/ml〕聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液〔用管口带有薄