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饮料中山梨酸钾含量的测定

一、实验目的

1、了解测定食品防腐剂的方法；

2、掌握测定山梨酸和山梨酸钾的测定方法；

3、掌握721分光光度计的使用方法。

4、掌握标准曲线的制作方法。二、实验原理

防腐剂是一种能够抑制食品中微生物生长和繁殖的化学物质。如果按照国家规定的数量使用，不仅可以防止食品生霉，而且可以防止食品变质或腐败，并能延长保存时间，同时对食用者也不会引起什么危害。目前，我国允许使用的品种主要有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、对羟基苯甲酸乙酯和丙酯、丙酸钠、丙酸钙、脱氢乙酸等。山梨酸是一种直链不饱

和脂肪酸，可参与人体内的正常代谢，并被同化而产生CO

2

和HO，所以几乎对人体没有毒性。

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山梨酸与山梨酸钾是目前国际上公认的安全防腐剂，已被很多国家和地区广泛使用。

山梨酸及其盐类使用范围：在酱油、醋、果酱类中，最大使用剂量1g／公斤；对低盐酱菜类、面酱类、蜜饯类等每公斤最多使用0.5g。山梨酸为无色、无臭的针状结晶，熔点134℃，沸点228℃。山梨酸难溶于水，易溶于乙醇、乙醚、氯仿等有机溶剂，在酸性条件下可随水蒸汽蒸馏，化学性质稳定。山梨酸钾易溶于水，难溶于有机溶剂，与酸作用生成山梨酸。

山梨酸及其盐的测定方法主要包括：（1）比色法（硫代巴比妥酸比色法）；（2）紫外分光光度法；（3）薄层层析法；（4）气相色谱法；（5）高压液相色谱法。

本实验采用硫代巴比妥酸比色法。其实验原理为：样品提取的山梨酸及其盐类，在硫酸及重铬酸钾的氧化作用下产生丙二醛，丙二醛与硫代巴比妥酸作用产生红色化合物，其颜色的深浅与山梨酸含量成正比，并于波长532nm处有最大吸收，符合比尔定律，用721分光光度计测定其吸光度，进行定量分析。

三、试剂

1、氢氧化钠溶液（1mol/L）：50ml

2、盐酸（1mol/L）：量取8.69ml36%盐酸，定容至100ml。

3、硫代巴比妥酸溶液：500ml

准确称取0.5g硫代巴比妥酸于100ml容量瓶中，加20ml蒸馏水，然后加入10ml氢氧化钠（1mol/L），充分摇匀。使之完全溶解后再加入11ml盐酸（1mol/L），用水稀释至刻度。

4、重铬酸钾（0.1mol/L）：M

＝294.19 配100ml。

重铬酸钾

5、硫酸（0.15mol/L）：98%浓硫酸C＝18.4mol/L移液管移取0.8ml定容至100ml。

6、重铬酸钾－硫酸混合液：以100ml0.1mol/L重铬酸钾和100ml0.15mol/L硫酸以1：

1的比例均匀混合备用。

7、山梨酸钾标准溶液（1mg/ml）：精确称取250mg山梨酸钾于250ml容量瓶中，用蒸馏水溶解并稀释至刻度。

8、山梨酸钾标准使用液（0.1mg/ml）：准确移取1mg/ml山梨酸钾标准溶液25ml于250ml容量瓶中，稀释至刻度，充分摇匀。

四、实验步骤

1、山梨酸钾标准曲线的绘制

分别吸取0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml山梨酸钾标准使用液于200ml容量瓶中，以蒸馏水定容（分别相当于0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ug/ml山梨酸钾）。再分别吸取2.0ml于相应的10ml比色管中，加2.0ml重铬酸钾－硫酸溶液，于100度水浴中加热7min，立即加入2.0ml硫代巴比妥酸溶液，继续加热10min，立即取出迅速用冷水冷却，在分光光度计上以530nm测定吸光度，并绘制标准曲线。

附：分光光度计的使用

接通电源，打开仪器开关，预热20分钟。

根据所需波长转动波长选择钮。

调零（用透光度调零）：将“方式键”（MODE）调至透光度T方式，盖好样品室盖，按“100%T”键调100%透射比，拉半格，按“0%T”键调透射比零，重复两次即可。

按“方式键”（MODE）将测试方式设置为吸光度方式，将参比液及测定液分别倒入比色皿3/4处，用擦镜纸擦清外壁，捏比色皿毛面，放入样品室内，盖上样品室盖。

将参比溶液推入光路中，按“100%T”键调整零。

将被测液推或拉入光路中，显示器上所显示的就是被测样品的吸光度参数。

比色完毕，关上电源，取出比色皿洗净，样品室用软布或软纸擦净。

2、样品的测定

吸取样品2ml于10ml比色管中，按标准曲线绘制的操作程序，加2.0ml重铬酸钾－硫酸溶液，于100度水浴中加热7min，立即加入2.0ml硫代巴比妥酸溶液，继续加热10min，立即取出迅速用冷水冷却，在分光光度计上以530nm测定吸光度。从标准曲线中查出相应的浓度。

3、结果计算

?x A x

?

1 2 2

x

???1

1.34

x——样品中山梨酸钾的含量，g/kg。

1

x——样品中山