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关于溶菌酶的溶菌作用溶菌酶的溶菌作用

实验原理溶菌酶（lysozyme）又称胞壁质酶（muramidase）或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶（N-acetylmuramideglycanohydrlase），是正常体液与分泌液中所含的一种小分子碱性蛋白质。它能水解革兰阳性菌细胞壁中的肽聚糖成分(作用于β-1，4糖苷键），使细胞壁崩解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。因此，该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。是非特异性免疫中一种重要的体液物质。第2页,共13页，2024年2月25日，星期天实验材料与器材1、人的唾液（含有溶菌酶）、溶菌酶标准品、生理盐水。2、细球菌（M.Lysodeikticus)。3、1.0%盐水琼脂管（7-8mL/管）、灭菌的1mL吸管、毛细吸管、打孔器、平皿、竹签和橡皮乳头等。第3页,共13页，2024年2月25日，星期天

注：①唾液②生理盐水（阴性对照）

③溶菌酶（阳性对照）

实验步骤：1、取灭菌的小平皿一个，用灭菌1mL的吸管吸取0.5mL(9亿/mL）细球菌活菌菌液注入平皿内。2、取已溶化并冷却至45℃-55℃的生理盐水琼脂管一支，倾注于上述平皿内，迅速水平混匀，平放待凝。3、用打孔器（孔径为6mm）打孔，用竹签挑出孔中琼脂。4、先用清水漱口，略待片刻将唾液吐于灭菌平皿内，用毛细吸管吸出（注意不要有气泡，不要溢出），并分别加入生理盐水和溶菌酶标准品。置37℃，18h后观察结果。31第4页,共13页，2024年2月25日，星期天预测实验结果阳性结果：加在唾液空周围出现一圈很明显的溶菌环。注意事项在实验中应该注意无菌操作，否则杂菌生长会影响溶菌环的观察第5页,共13页，2024年2月25日，星期天小吞噬实验实验原理机体内具有吞噬功能的细胞可分为两大类，即小吞噬细胞和大吞噬细胞。小吞噬细胞一般指血液中的中性粒细胞。中性粒细胞（neutrophilicgranulocyte）在瑞氏染色血涂片中，胞质呈无色或极浅的淡红色，有许多弥散分布的细小的（0.2～0.4微米）浅红或浅紫色的特有颗粒。细胞核呈杆状或2～5分叶状，叶与叶间有细丝相连。其颗粒表面有一层膜包裹，颗粒中含髓过氧化物酶、酸性磷酸酶、吞噬素、溶菌酶、β葡糖苷酸酶、碱性磷酸酶等。中性粒细胞具趋化作用、吞噬作用和杀菌作用。第6页,共13页，2024年2月25日，星期天实验材料与器材：1、表面葡萄球菌菌液（9亿/mL）。2、3.8%枸櫞酸钠或肝素（25U/mL）。3、毛细吸管、凹玻片、载玻片、牙签、甲醇、瑞氏-姬娒萨染料、PH6.4PB、酒精、棉球、采血针等。第7页,共13页，2024年2月25日，星期天实验步骤：1、取厚凹玻片一张，在凹孔中滴加一滴（0.4mL）3.8%枸櫞酸钠或肝素（25U/mL）。2、酒精棉球消毒手指后，用采血针从消毒部位采取2大滴（约0.2mL）加入凹孔中混匀。3、加表皮葡萄球菌菌液1滴（0.02-0.04mL），然后用牙签轻轻搅匀。第8页,共13页，2024年2月25日，星期天4、将玻片放湿盒内，置37℃孵箱中40-50min。5、作用完毕，取出1滴制成薄片，自然干燥。6、置瑞氏液1min，置PH6.4PB中3min，置瑞氏-姬娒萨染料染5-10min，蒸馏水洗，待干镜检。第9页,共13页，2024年2月25日，星期天预测实验结果胞浆呈淡蓝色或淡红色，细菌呈深蓝色或紫色，红细胞呈褐色，细胞核呈紫红色。注意事项1、个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能力亦不同。2、涂血片时不宜太厚，否则不宜观察。结果第10页,共13页，2024年2月25日，星期天第11页,共13页，2024年2月25日，星期天胞质呈无色或极浅的淡红色，有许多弥散分布的细小的（0.2～0.4微米）浅红或浅紫色的特有颗粒。细胞核呈杆状或2～5分叶状，叶与叶间有细丝相连。返回第12页,共13页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第13页,共13页，2024年2月25日，星期天