大肠杆菌葡萄糖苷酶检测.ppt

葡萄糖苷酶有两种类型：β-葡萄糖苷酶（又称β-D-葡萄糖苷水解酶）β-葡萄糖苷酶广泛存在于自然界中，它可以来源于植物、微生物，也可来源于动物。用途：在饲料工业上，β-葡萄糖苷酶通过破解富含纤维的细胞壁，使其包含的蛋白质、淀粉等营养物质释放出来并加以利用，同时又可将纤维降解为可被畜禽机体消化吸收的还原糖，从而提高饲料利用率。在食品开发上，其作为特殊的风味酶已得到应用，如李平等将黑曲霉β-葡萄糖苷酶应用在果汁、茶汁、果酒等制备上，能起到较好的增香效果α-葡萄糖苷酶抑制剂α-葡萄糖苷酶抑制剂是一类以延缓肠道碳水化合物吸收而达到治疗糖尿病的口服降糖药物。α-葡萄糖苷酶抑制剂是比较成熟的治疗糖尿病药物，能够降低高血糖。了解葡萄糖甘酶荧光法检测大肠杆菌的原理掌握葡萄糖甘酶荧光法检测大肠杆菌的方法实验器材试剂：LST-MUG肉汤，Columbia-MUG琼脂培养基，生理盐水仪器：吸管：1mL和10mL，带刻度；试管：16mm×160mm；稀释瓶：500mL三角瓶或广口瓶；玻璃珠；均质器；水浴箱或培养箱：36±1℃；长波紫外光灯：366mm，功率＜6W。操作步骤：每个样品选三个连续稀释倍数的稀释液，每个稀释倍数的稀释液接种三管LST-MUG肉汤，每管1mL。将接种管于30min内放入36±1℃水浴或培养箱内，培养24±2h。将各管培养物拿至暗室，在长波紫外光灯照射下观察。凡显蓝色荧光的为大肠杆菌阳性。在阳性管上做好标记并记录。从产气而不显荧光的各管取培养物。划线接种Columbia-MUG琼脂平板，36±1℃培养24±2h。将培养后的Columbia-MUG平板拿至暗室，打开皿盖，在长波紫外光灯照射下观察有无蓝色荧光。凡显蓝色荧光的，无论其面积大小，均记为原LST-MUG管培养物为大肠杆菌阳性。葡萄糖苷酸亦可和其他各种产荧光性试剂结合，因此可供检测微生物中的葡萄糖苷酶酸酶。而且灵敏度高、检测快速、准确性强。**实验目的实验原理已知有97％分离出的大肠杆菌产生葡萄糖苷酸酶，此酶能使葡萄糖苷酸-4-甲基伞形花烯(简称MUG)分解而生成甲基伞形花酮，在365nmUV照射下产生特异性蓝色荧光，根据这一原理，对地面水中大肠杆菌快速检测研究(简称酶荧光法)方法一：标准检测法此方法能够对食品中大肠杆菌的定量检验，适用于出口食品(不包括贝类)卫生质量的监视和出口前的筛选检验。方法二、酶荧光法材料和器材：水样来源采取河水、井水湖水。测定时，水样均用无菌水稀成3个不同浓度：原水、1/10稀释水、1/100稀释水。器材365nm×8W紫外线灯、18孔细胞培养塑料、可调容量加液、1．0（mg／ml）MUG溶液、细菌增菌培养、乳糖发酵管及远藤氏培养基。操作方法每个18孔塑料板可测1份三个不同稀释度的水样。在第1排6孔加原水1ml，第2排6孔加1／10稀释水1ml，第3排6孔加1／100稀释水1ml。然后各孔加增菌1ml，除对照孔外，各加MUG溶液100μl，44℃培养。紫外线灯观察荧光显示结果