抗原与抗体的相互作用及免疫学检测.ppt

用于测定未知抗原/抗体时，采用两套系统，一套是待测的抗原抗体系统，称为检测系统，一套是包括绵羊红血球和抗绵羊红血球抗体的指示系统。待测系统中有无待测得抗原/抗体是利用指示系统中是否出现溶血来判断。反应的过程是首先加待测得抗原/抗体，反应一段时间后加入补体，在反应一段时间后加指示系统。有待测抗原抗体结合时，必然结合补体，不会出现溶血，没有待测物质时出现溶血。第31页,共38页，2024年2月25日，星期天第32页,共38页，2024年2月25日，星期天四、荧光抗体技术免疫荧光法是将荧光素与特异性血清抗体以化学方式结合起来，然后将此荧光标记了的抗体作为一种试剂在特定条件下浸染标本，使与标本中相应的抗原产生结合反应，再在荧光显微镜下，以紫外光为光源进行观察。当出现荧光时，表明标记抗体存在，相应的抗原也存在。免疫荧光法有直接法和间接法两种。第33页,共38页，2024年2月25日，星期天第34页,共38页，2024年2月25日，星期天第四节免疫亲和层析生物高分子具有能和某种相对应的专一分子可逆结合的特性，例如酶的活性中心或别构中心能和专一的底物、抑制剂、辅助因子效应剂通过某些次级键相结合，并在一定条件下又可以解离。抗体与抗原，激素及其受体，核糖核酸与其互补的脱氧核糖核酸等体系，都具有类似的特性。这种高分子和配基之间形成专一的可解离的复合物的能力称为亲和力。根据这种具有亲和力的生物分子间可逆的结合和解离的原理发展起来的层析就称为亲和层析。第35页,共38页，2024年2月25日，星期天亲和层析法的基本过程：1、偶联：将欲分离的高分子物质的配基在不影响其生物功能的情况下与水不相溶性的载体结合，制成亲和吸附剂或免疫吸附剂。2、装柱：在层析柱内装入固相化的配基3、亲和层析：含有高分子物质的混合液在有利于配基和高分子之间形成复合物的条件下进入装有亲和吸附剂的层析柱。高分子物质结合留在柱内，其他杂质流出。4、洗脱：改变条件，促使配基和高分子物质分离而释放出需要的物质。5、再生：将亲和层析柱的充分洗涤再生，用于下一周期的纯化工作。第36页,共38页，2024年2月25日，星期天第37页,共38页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第38页,共38页，2024年2月25日，星期天关于抗原与抗体的相互作用及免疫学检测体液免疫的基础是抗原和抗体分子的结合，这种结合可以是游离形式的，也可以结合在细胞表面。通过抗原抗体的结合继发出各种生理效应，如：溶细胞效应、促吞噬作用、凝集作用、沉淀作用、调节作用等，形成一整套机体体液免疫功能。抗原决定簇与抗体结合部位的结合，要求分子结构有互补性，也因此具有高度的特异性。第2页,共38页，2024年2月25日，星期天第一节抗原与抗体反应的特点一、特异性抗原与抗体相互结合只局限于一些大分子表面的特定部位，即抗原决定簇和抗体结合位点之间，且以亲和力的作用方式结合在一起。抗原抗体的结合并没有共价键形成，而是由这些特定部位之间的短程分子力相互作用的结果。这些吸引力只有在极短的距离内才有效。因此抗原决定簇与抗体结合位点在空间上必须处于紧密接触状态，才能产生足够的结合力。这种分子间的互补结构决定了抗原抗体结合的专一性。第3页,共38页，2024年2月25日，星期天抗原抗体分子间的作用力，即亲和力包括以下几种：1、盐键（离子键）2、范德华力3、疏水作用4、氢键第4页,共38页，2024年2月25日，星期天二、抗原与抗体结合的可逆性抗原抗体的结合反应是一个可逆的反应Ab+AgAb:Ag由于抗原抗体结合的可逆性，可利用亲和层析法分离纯化抗原或抗体；利用待测抗原和标准抗原与抗体的竞争结合，进行抗原或抗体的定量测定，如放免检测法、酶联免疫吸附法等第5页,共38页，2024年2月25日，星期天三、抗原与抗体反应中量的关系当抗体与抗原结合时，如果是颗粒抗原，则出现凝集现象；如果是可溶性抗原，则产生沉淀作用。这些可见现象的出现是以抗原与抗体反应特异性和亲和力为基础的，同时也是抗原抗体反应的继发过程。当抗原与同型抗体相遇时，在合适条件下，不论彼此量的多少，都立即发生特异性的结合形成抗原抗体复合物，这一过程通常只需要几秒的时间便可完成，称为反应的一级阶段。第6页,共38页，2024年2月25日，星期天在一级阶段之后，继发出现抗原与抗体间进一步交联而形成网络状凝集物，进而出现可见的凝集和沉淀，称为反应的二级阶段。这一阶段是抗原抗体网格生长的