辣椒细菌性斑点病抗病性鉴定技术规程.pdf

辣椒细菌性斑点病抗病性鉴定技术规程

1范围

本文件规定了辣椒细菌性斑点病[(Xanthomonascampestrispv.vesicatoria(Doidge)Dye]抗病性鉴

定过程的准备、接种、调查和评价等技术内容。

本文件适用于辣椒（CapsicumannuumL.）品种或种质资源对细菌性斑点病抗性的室内鉴定及评价。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T36851辣椒细菌性斑点病菌检疫鉴定方法

SN/T1538.1培养基制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4准备

4.1培养基制备

肉汁胨培养基（NA）：牛肉浸膏3.0g，酵母浸膏1.0g，蛋白胨5.0g，葡萄糖（或蔗糖）10.0g，琼

脂粉10.0g，蒸馏水1000mL，pH6.8～7.0，高压灭菌121℃20min。

酵母膏葡萄糖培养基：酵母浸膏10.0g，D-葡萄糖20.0g，碳酸钙20.0g，琼脂粉10.0g，蒸馏水1000

mL，除碳酸钙外，先将其他成分加热溶解，然后加碳酸钙，将pH值调到7.2，再高压灭菌121℃20min。

4.2接种体制备

4.2.1病原物分离

从发病植株叶片的典型病斑上采集病样，采用平板划线法或稀释平板法进行分离，挑取单个菌落进

行纯化培养，经柯赫氏证病法则测定后，对纯化的分离物进行形态学、分子学鉴定等，确定为辣椒细菌

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性斑点病病原菌，并将该病菌4℃保存备用。病原物的分离与鉴定符合GB/T36851的规定和附录A的要

求。

4.2.2接种体制备

将获得的病原菌在NA平板培养基上进行纯培养，28℃恒温培养36h～48h，用接种环刮取病原菌，

将其放入装有适量无菌水的三角瓶中，充分搅拌均匀，用稀释平板计数法或血球计数板计数法测定菌悬

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液浓度，配制成3×10cfu/mL病菌悬浮液，供接种使用。

4.2.3菌种保存

4.2.3.1斜面保存

将纯化的病原物划线转接到试管斜面培养基上，28℃恒温培养36h～48h，待病菌长满斜面后放4℃

条件下冷藏保存，保存期为1周～10周。

4.2.3.2超低温甘油保存

将获得的病原菌在NA平板培养基上培养，28℃恒温培养36h～48h，用接种环挑取病原菌放入装有

灭菌的甘油（甘油:水=1:4）冻存管中混匀，放于-80℃超低温冰箱下长期保存。

4.3鉴定对照品种选择

抗病性鉴定时选择“earlycalwonder”（甜椒品种）为感病对照品种。

4.4鉴定设计

鉴定材料随机排列，每份材料重复3次，每次重复10株苗。

4.5鉴定材料育苗

选择颗粒饱满、无病虫害的辣椒种子，将其放入高锰酸钾溶液中浸泡10min～15min，捞出放入温

水中浸泡8h～12h，取出用湿毛巾包裹放于恒温箱内进行催芽，温度保持在25℃～30℃，待种子露白后

即可进行播种。将种子均匀地撒在育苗盘上，覆盖一层薄土，覆地膜保湿，夏季需遮阴。育苗期间保持

温度在20℃～30℃，当辣椒苗长出6片～10片真叶时，在接种室接种病原菌进行抗病性鉴定。

4.6接种室与鉴定室设置

4.6.1接种室设置

接种室又称无菌室，是分离和移接菌种的小房间，应包括接种间和缓冲间。接种室的地板、墙壁、

天花板要平整光滑，以便擦洗消毒。门窗应密闭，关闭后应与外界隔绝空气流通，房间应设有工作台，

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以便放置酒精灯、常用接种工具，工作台上方和缓冲间天花板上应安装能任意升降的紫外线杀菌灯和日

光灯。

4.6.2鉴定室设置

人工接种室内应具备人工调节温度、湿度及稳定的光照条件；亦可使用恒温光照箱，温度设定25℃～

27℃，光暗交替12h，光照6000Lx，内部空间保持相对湿度90%～100%。