成胶质细胞瘤U87干细胞样细胞的培养及其代谢表型与成瘤能力鉴定.docxVIP

2024年1月基础医学与临床January2024

第44卷第1期BasicandClinicalMedicineVol.44No.1

文章编号：1001?6325(2024)01?0016?07

研究论文

成胶质细胞瘤U87

干细胞样细胞的培养及其代谢表型与成瘤能力鉴定

仇佳星，刘宇涵，郭泓江，张迪雅，王钰铖，鞠瑞?,郭磊?

中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院药理学系，北京100005

摘要：目的培养成胶质细胞瘤U87干细胞样细胞(U87SLCs),检测其干性标志物的水平、线粒体呼吸能力和体内

成瘤能力。方法DMEM/F?12中添加B?27以及生长因子EGF和bFGF作为无血清干细胞培养基培养U87SLCs;悬

浮培养U87SLCs使用神经球培养法，贴壁培养U87SLCs通过在培养表面包被Matrigel基质胶实现；通过RT?qPCR

和Westernblot检测培养物的干性标志物mRNA和蛋白质水平；通过流式细胞测量术检测培养物中CD133+细胞的比例；通过Seahorse实时细胞代谢分析检测细胞耗氧速率的变化；通过接种动物皮下移植瘤验证细胞成瘤能力的改变。结果干细胞培养基中的U87SLCs在1周内即会成长为典型的细胞球形态，细胞球在培养过程中会不断增大；在贴壁剂合适的浓度下，U87SLCs可以在干细胞培养基中完好地平铺贴壁增殖；CD133、nestin、OLIG2、CD44、CD15、整合素α6(ITGA6)等干性标志物的mRNA表达水平在两种方式培养后与U87相比均显著提升(P0.05),CD133和nestin的蛋白水平在两种方式培养后也均升高(P0.05);U87SLCs展现出了更高的线粒体储备呼吸能力(P0.05);U87SLCs能够以更少的接种细胞数形成更大的皮下肿瘤(P0.05),U87SLCs体内增殖更加迅速，具有更强的成瘤能力。结论U87SLCs具有典型的干性特征，是一个良好的干性更高的肿瘤细胞模型。

关键词：成胶质细胞瘤；干细胞样细胞；神经球；干性

中图分类号：R739.41文献标志码：A

DOI:10.16352/j.issn.1001?6325.2024.01.0016

CultureofglioblastomaU87stem?likecellsandidentification

CultureofglioblastomaU87stem?likecells

QIUJiaxing,LIUYuhan,GUOHongjiang,ZHANGDiya,WANGYucheng,JURui?,GUOLei?DepartmentofPharmacology,InstituteofBasicMedicalSciencesCAMS,SchoolofBasicMedicinePUMC,Beijing100005,China

markers,mitochondrialrespiratorycapacityandthecapacityofinvivotumorigenesis.MethodsB?27,growth

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cultureofU87SLCswassuspendedusingtheneuro?sphereformationassay,whileadherentcultureofU87SLCswasEGF

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