葡萄酒中 7种链格孢霉毒素的测定 高效液相色谱-串联质谱法（征求意见稿）.docx

T/NAIAXXX—2023

葡萄酒中7种链格孢霉毒素的测定高效液相色谱-串联质谱法

1范围

本文件规定了葡萄酒中7种链格孢霉毒素的高效液相色谱-串联质谱检测方法。本文件适用葡萄酒中7种链格孢霉毒素的测定和确证。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

LS/T6133-2018粮油检验主要谷物中16种真菌毒素的测定液相色谱-串联质谱法T/AFFI038-2023葡萄干中8种真菌毒素残留量的测定液相色谱-串联质谱法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4方法提要

试样经甲酸乙腈溶液超声提取，QuEChERS法净化后，经反相色谱柱分离，以保留时间定性，供高效液相色谱-串联质谱仪测定和确证，外标法定量。

5试剂和材料

本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

5.1试剂

5.1.1乙腈：色谱纯。

5.1.2甲醇：色谱纯。

5.1.3甲酸：优级纯。

5.1.4氯化钠：优级纯。

5.1.5无水硫酸镁粉末：美国安捷伦公司。

5.1.6十八烷基（C18）粉末：美国安捷伦公司。

5.1.7N-丙基乙二胺（PSA）粉末：美国安捷伦公司。

5.1.81%甲酸的乙腈溶液：取1mL甲酸用乙腈定容到100mL。5.1.950%乙腈溶液：取50mL乙腈和50mL水混合均匀。

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5.2标准品

5.2.1标准品：番茄交链孢菌毒素（AAL，CAS号79367-52-5）、交链孢烯（ALT，CAS号29752-43-0）、交链孢毒素I（ATX-1，CAS号56258-32-3）、链格孢酚单甲醚（AME，CAS号26894-49-5）、细交链孢菌酮酸（TEA，CAS号610-88-8）、交链孢酚（AOH，CAS号641-38-3）、腾毒素（TEN，CAS号28540-82-1），纯度均≥98.3%。

5.2.2标准储备液（100.0μg/mL）：分别准确移取7种链格孢霉毒素基准物质适量，分别用乙腈溶解并定容,配制成100.0μg/mL的标准储备溶液，于-20℃避光贮存。

5.2.3混合标准储备溶液的配制：分别准确吸取7种链格孢霉毒素各1.0mL于10mL容量瓶中，乙腈定容至刻度，配制成10.0μg/mL的混合标准储备液于-20℃避光贮存。

5.2.412种真菌毒素标准工作溶液：分别准确吸取不同体积混合标准储备液，用空白葡萄酒基质定容至1.0mL，配制成7种链格孢霉毒素的浓度分别为1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0的系列标准工作溶液，临用现配。

6仪器和设备

6.1液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源(AJS-ESI)。6.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。

6.3涡旋混合器。

6.4高速离心机：最大转速10000r/min。6.5超声波发生器。

6.6氮吹仪。

7分析步骤

7.1试液的提取

称取10.0g混匀的葡萄酒样品于50mL具塞离心管中,准确加入10mL含1%甲酸的乙腈溶液和5g氯化钠，涡旋混匀，超声提取10min，8000r/min离心5min，移取上清液于另一50mL离心管中，重复提取1次，合并上清液。加入至盛有无水硫酸镁150mg，C18粉末50mg和N-丙基乙二胺（PSA）50mg的净化管中，经涡旋离心，对提取物进行净化处理。移取上清液2.0mL于45℃氮气保护下吹干，用50%的乙腈溶液复溶至2.0mL，经0.22μm有机滤膜过滤后，将滤液引入高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）进行分析。

7.2仪器参考条件

7.2.1液相色谱参考条件

色谱柱：ACQUITYUPLC?BEHC18，2.1（内径）×100mm，粒径1.7μm或性能相当。

柱温：25℃。

流动相：A：0.1%甲酸溶液，B：甲醇；梯度洗脱见表1。

流速：0.25mL/min。

进样量：5μL。

表1流动相及梯度洗脱条件

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时间/min

流速/（mL/min）

流动相A/%

流动相B