(18)--7.2 正向遗传学化学生物学导论.ppt

COMBINATORIALCHEMISTRYAdvancesinsynthesis,purification,andanalysisfurtherrefinethecombinatorialapproach,nowamainstreamtoolindrugdiscovery.20世纪70年代300ul90年代10ul近几年0.1ul微量化正向化学遗传学-------基于细胞高通量筛选以细胞为筛选模型，应用大规模检测技术，分析小分子化合物对细胞形态的影响。蛋白植入96孔板中，测定酶反应效率或结合能力,找到与蛋白作用的化合物。反向化学遗传学-------蛋白质为靶标的高通量筛选除了测试小分子与目标蛋白的键合作用，测试蛋白质在未处理过的信号网中活性的改变是发现和发展小分子探针的另一个重要方法。为了获得小分子处理前后生物系统的性质，采用类似物对上千种突变进行遗传学筛选以使基因组达到饱和(一个基因具有一个或多个突变)，需要发展一种合适的表型筛选方法。2.表型筛选测试蛋白活性改变是发展小分子探针的一个重要方面。小型化实验减少开销；空间需求；试剂消耗；节省时间和人力。96孔板384孔1536孔限制因素培养基消耗毒素积累小空间中媒介蒸发为了提高找到生物机理的探针的效率，必须有较高的“信噪比”，以便于分析方法足以分析哪个分子是有效的。理想的状况是，根据光谱吸收值、荧光、磷光强度的变化来观察记录，而不是利用传统的可视化观察或者二进制1、0来量化反应活性。检测设备荧光成像读板器（fluorescenceimagingplatereader，FLIPR）报告基因包含一个或多个特定的基因调节元素，与感兴趣的信号通路中某个重要的因子的基因融合，调控下游表达，利用报告基因产物标定目标基因的表达调控。这些报告基因包含一个或多个特定基因调节元素，将这此特定元素与感兴趣的信号通路中某个重要因子的基因(如cAMP响应元素键合CREB蛋白)融合,在调控序列下表达，利用报告基因产物(如lucifease或者β-galactosidase)来标定目标基因的表达调控。翻译后修饰不能使用FLIPR或报告基因的方法测定筛选可调节修饰的小分子研究翻译后修饰不同于报告基因实验，这种技术不需要设计细胞系统，而是利用了细胞能够产生蛋白质的能力，在不需要过度表达蛋白质的情况下，利用同源蛋白质来分析。这一形式促进了对转化形成、从不同组织类型或不同遗传背景中的细胞线的检测。3.目标识别正向遗传学依赖于当扰乱产生了一个期望的表型时，生物系统展现可能靶标的能力。现在的药物正向化学遗传学确认分子靶标优化小分子小分子直接处理寻找表型效应*Backgroundprovidedbym62Visualcommunications,visitformoreinformation*Backgroundprovidedbym62Visualcommunications,visitformoreinformation*Backgroundprovidedbym62Visualcommunications,visitformoreinformation*Backgroundprovidedbym62Visualcommunications,visitformoreinformation*Backgroundprovidedbym62Visualcommunications,visitformoreinformation*Backgroundprovidedbym62Visualcommunications,visitformoreinformation*Backgroundprovidedbym62Visualcommunications,visitformoreinformation*Backgroundprovidedbym62Visualcommunications,visitformoreinformation*Backgroundprovidedbym62Visualcommuni