DB2306T 183-2023 美国红枫“秋火焰”组培快繁技术规程.docx

ICS65.020.40CCS

ICS

65.020.40

CCS

B64

黑 龙 江 省 大 庆 市 地 方 标 准

DB2306/T183—2023

美国红枫秋火焰组培快繁技术规程

2023-12-31发布 2024-01-31实施

大庆市市场监督管理局 发布

DB2306/T183—2023

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目 次

前言 II

范围 1

规范性引用文件 1

术语和定义 1

组织培养环境 1

培养基 1

培养基的制作（成分分子量使用浓度mg/L） 1

培养基的灭菌 2

无菌体系的建立 2

取材时间 2

外植体消毒处理 2

外植体培养 2

茎芽增殖培养 2

壮苗培养 3

生根培养 3

组培苗驯化和移栽 3

驯化 3

移栽 3

生产档案 3

前 言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由黑龙江省大庆市林草局提出。

本文件起草单位：大庆油田生态环境管护公司、中国石油天然气集团有限公司质量健康安全环保部本文件主要起草人：王宏霞、吴连峰、柳军、李镏钰、刘尧、赵淑芹、朱珊珊、孟艳、王忠庆、韩

志敏、徐亮、冯满、翟晶、杨扬

DB2306/T183—2023

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美国红枫秋火焰组培快繁技术规程

范围

本文件规定了美国红枫（AcerrubrumRedMaple）组培快繁的组织培养环境、培养基、无菌体系的建立、茎芽增殖培养、壮苗培养、生根培养、组培苗驯化与移栽以及生产档案。

本文件适用于大庆地区美国红枫组培快繁育苗。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

LY/T1882 林木组织培养育苗技术规程

术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

组织培养环境

组织培养环境参照LY/T1882相关规定准备。

培养基

培养基的制作（成分分子量使用浓度mg/L）

配制改良MS母液Ι（10倍）

每升培养基用量：NH4NO313000mg；KNO319000mg；CaCl2·2H2O400mg；MgSO4·7H2O7400mg；

KH2PO41700mg。

配制改良MS母液Π（100倍）

MnSO4·4H2O2230mg；ZnSO4·7H2O860mg；CoCl2·6H2O2.5mg；CuSO4·5H2O25mg；H3BO3620

mg；Na2MO4·2H2O25mg；KI83mg；FeSO4·7H2O2780mg；Na2-EDTA3730mg。

改良MS母液Ш（50倍）

烟酸25mg；盐酸吡哆醇25mg；盐酸硫胺素5mg。

改良MS母液Ⅳ（100倍）:肌醇10000mg。

改良MS母液Ⅴ（100倍）：甘氨酸50mg。

每种植物激素母液单独配制，浓度为0.1mg/mL～2mg/mL。

每升培养基用量：分别吸取母液Ι100mL，母液Π10mL、母液Ш20mL、母液Ⅳ10mL、母液Ⅴ10mL，激素按下面配方移取，置入1000mL定容瓶中，加30g蔗糖，5g琼脂粉，加蒸馏水定容至1000mL，将混合溶液加热溶解，至琼脂粉全部融化，调整PH值调至5.8～6.0。

培养基的灭菌

培养基配制后，趁热分装，240mL的组培瓶装入30mL-40mL培养基，封口并标明种类。置于高压灭菌锅中121℃下灭菌30min。配制好的培养基放到2℃～25℃避光无菌室中避光存放，时间不超过1周。

无菌体系的建立

取材时间

生长季均可取材，5-6月且取一年生半木质化带芽枝条为最佳。

外植体消毒处理

将枝条剪成小段，用肥皂水清洗枝条并用流水冲洗1h后，转入超净工作台中，用75%酒精浸泡30s后再用2%次氯酸钠浸泡5min。无菌水冲洗3次～5次后，将消毒后的枝条放入烧杯中，切去与消毒药液接触的伤口，将枝条截取成3cm～5cm长、带1个～2个芽的茎段（外植体）用于组织培养

。

外植体培养

初代培养基组成：改良MS培养基+0.5mg/L6-BA+0.1mg/LTDZ+0.1mg/LGA3（pH6.0

）。

初代培养条件：组培室温度（24