实验6-水的卫生细菌学检验.pptVIP

实验五水的卫生细菌学检验（二）实验目的学习平板菌落计数的原理和方法。学习大肠菌群数的检测原理和方法。实验材料菌种：水样（大肠杆菌菌悬液）其他：营养琼脂培养基，乳糖胆盐发酵管培养基，EMB琼脂培养基，无菌生理盐水等实验原理水中大肠菌群数的测定原理：为什么选用大肠菌群作为水的卫生指标？如何测定？平板菌落计数法的原理？实验内容制备EMB平板将预先融化好的EMB琼脂倾注在培养皿中，冷却凝固后备用（约15～20ml/皿，8皿/大组）；菌悬液的稀释分装无菌生理盐水至空试管，9ml/管，4管/2人组，并分别标示10-1～10-4；用无菌吸管精确地吸取1ml已充分混匀的菌悬液，注入10-1试管中（注意吸管不要碰到水面）。然后另取1支无菌吸管，于10-1试管中来回吹吸三次，使之混匀，即成10-1稀释液。再从10-1试管中吸1ml注入10-2试管中，重复上述操作，直至制成10-4稀释液。倾注平板（平板菌落计数）取无菌培养皿6套，每2套为一组，在每组皿底分别写上10-1、10-2、10-3；用对应的无菌吸管分别吸取10-1、10-2和10-3稀释液各1ml，对号放入编好号的无菌培养皿中；尽快向上述盛有不同稀释度菌液的平皿中倒入融化后冷却至45℃左右的营养琼脂培养基，每皿约15ml，置水平位置迅速旋转平皿，使培养基与菌液混合均匀，而又不使培养基荡出或溅到皿盖上；待培养基凝固后，倒置于37℃恒温培养箱中培养24h，观察结果。接种液体发酵管（MPN法）取乳糖胆盐发酵管9支，每3支为一组，分别标示1、0.1、0.01，另1支为空白对照；用对应的无菌吸管分别吸取10-3稀释液1ml、10-4稀释液1ml和0.1ml，分别接种至上述已标记好的发酵管中，轻轻振荡（或旋转）混匀，3支/稀释度；置于37℃恒温培养箱中培养24h，观察结果。EMB平板划线将接种环在酒精灯火焰上灭菌；用灭菌的接种环沾取菌悬液少许；用接种环在EMB平板上划线（约平板1/4），将接种环加热灭菌，并旋转平板（约80～90°），继续划线。如此反复进行3～4次；倒置于37℃恒温培养箱中培养24h，观察结果。五.实验结果报告与思考题平板菌落计数：统计每个稀释度2个平板上生长的菌落数，求出平均值，并按讲义P27～P28所述原则计算出菌液中细菌含量；大肠菌群数测定：观察每个稀释度中3管的生长（变混浊）、产酸（变黄）和产气（杜氏小管上端有气泡）情况，记录，并查找讲义P26大肠菌群细菌的最近似数检索表，计算所给菌液中大肠菌群细菌数。EMB平板划线分离：观察每个区菌体生长情况，是否有单菌落出现，出现在第几区以及菌落形态、颜色和表面色泽。思考题：讲义P206；P252；P284*****