微生物与免疫学工业微生物学.ppt

第31页,共42页，2024年2月25日，星期天第六节免疫标记技术抗原或抗体用小分子标记剂（荧光素、酶、放射性同位素或电子致密物质）进行标记，以提高抗原抗体反应的灵敏度，可用于定性、定量和分子定位。优点：特异性强，灵敏度高，反应速度快，容易观察。第32页,共42页，2024年2月25日，星期天1.免疫荧光法在荧光显微镜下观察，亦可用荧光计定量。第33页,共42页，2024年2月25日，星期天2.酶联免疫吸附测定（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA）将可溶性抗体或抗原吸附到聚苯乙烯等固相载体上进行免疫酶反应的定性定量方法。抗原与抗体的免疫反应和酶的高效催化反应有机结合，是目前应用最广泛的生物学技术。酶与抗原或抗体结合后，不改变抗原或抗体的免疫学反应特异性，也不影响酶本身的活性。结合在抗原抗体复合物上的酶，催化无色底物生成有色产物，分光光度计比色以对抗原或抗体定量或定性。常用的酶：辣根过氧化物酶（底物：邻苯二胺）碱性磷酸酶（底物：对硝基酚磷酸盐）第34页,共42页，2024年2月25日，星期天直接法：用酶包被的抗原或抗体直接检测包被在酶标板上的抗体或抗原，被检抗原或抗体的量与产物颜色成正比。间接法（检测抗体）：将酶标记在抗抗体上，当抗原与抗体结合后，再用酶标抗抗体来检查抗体是否与抗原结合。双抗体夹心法（检测抗原）：先用一种未标记的抗体包被酶标板，然后每孔加入待测抗原，洗涤除去未结合抗原。然后加入对该抗原特异的第二抗体-酶结合物（形成了抗体-抗原-抗体三明治夹心层），再加入酶的底物，观察颜色反应。第35页,共42页，2024年2月25日，星期天直接法间接法（检测抗体）双抗体夹心法（检测抗原）第36页,共42页，2024年2月25日，星期天3、放射免疫测定（radioimmunoassay，RIA）放射免疫测定是一种以放射性同位素作为标记物，将同位素分析的灵敏性和抗原抗体反应的特异性这两大特点结合起来的测定技术。又分为放射免疫分析法和放射免疫测定自显影法。放射免疫技术灵敏度极高，能测得毫微克至微微克（10-9~10-12g）的含量，广泛用于激素、核酸、病毒抗原、肿瘤抗原等微量物质测定。但需特殊仪器及防护措施，并受同位素半衰期的限制。4、免疫印迹（immunoblot或westernblot）免疫印迹是在用于DNA分析的DNA印迹（southernblot）技术基础上发展起来的蛋白质检测技术。其原理是将SDS电泳的高分辨率与免疫反应的高度特异性相结合。待测样品经SDS电泳分离后，转移到固相介质如醋酸纤维膜上，然后用标记抗体揭示特异抗原的存在。本方法广泛用于蛋白质样品分析研究。第37页,共42页，2024年2月25日，星期天1.生物制品凡是人工免疫用的抗原和抗体制品以及诊断用的抗原和抗体制品统称为生物制品。第五节、生物制品及其应用第38页,共42页，2024年2月25日，星期天2.分类1）特异性免疫预防和治疗剂疫苗活疫苗死疫苗常规疫苗类毒素自身疫苗抗原亚单位疫苗（预防）化学疫苗新型疫苗多肽疫苗基因工程疫苗DNA疫苗抗毒素抗病毒血清抗菌血清抗体免疫球蛋白制剂