蜂王浆及蜂王浆冻干粉中羟甲基糠醛含量的测定高效液相色谱法.pdfVIP

蜂王浆及蜂王浆冻干粉中羟甲基糠醛的测定高效液相色谱法

1范围

本文件规定了蜂王浆及蜂王浆冻干粉中羟甲基糠醛含量的高效液相色谱测定方法。

本文件适用于蜂王浆及蜂王浆冻干粉中羟甲基糠醛含量的测定

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

羟甲基糠醛Hydroxymethylfurfural

六碳糖在酸性条件下失去三分子水生成的具有呋喃环结构的化合物，CAS号：67-47-0。

4原理

样品经氨水溶解，用乙酸乙酯提取羟甲基糠醛，离心，取上清液蒸干，用6%甲醇超声溶解，过0.22μm

滤膜，用液相色谱仪紫外检测器（λ=285nm）检测，绘制空白基质标准曲线，外标法定量。

5试剂和材料

除非另有规定，所有试剂均为分析纯，试验用水应符合GB/T6682中一级水的规定要求。

5.1氨水（NH·HO）：含氨（NH）25～28%。

323

5.2乙酸乙酯(CHCOOCH)。

325

5.3磷酸(HPO)：优级纯，含量85%。

34

5.4甲醇(CHOH)，液相色谱纯。

3

5.5羟甲基糠醛(CHO)，CAS号：67-47-0，标准品，纯度≥99%。

663

5.6羟甲基糠醛贮备液（1mg/mL）：称取羟甲基糠醛（5.5）25mg，精确到±0.1mg，于25mL容量

瓶中，用甲醇溶解并定容。-18℃下保存期为24个月。

1

5.7羟甲基糠醛中间液（100mg/L）：取1.0mL羟甲基糠醛贮备液(5.6),用甲醇稀释定容至10mL。

-18℃下保存期为12个月。

5.8羟甲基糠醛工作液Ⅰ（20mg/L）：取2.0mL羟甲基糠醛中间液(5.7),用水稀释定容至10mL。

现配现用。

5.9羟甲基糠醛工作液Ⅱ（2mg/L）：取1.0mL羟甲基糠醛工作液Ⅰ(5.8),用水稀释定容至10mL。

现配现用。

5.10羟甲基糠醛工作液Ⅲ（0.2mg/L）：取1.0mL羟甲基糠醛工作液Ⅱ(5.9),用水稀释定容至10mL。

现配现用。

5.110.4%磷酸溶液：取4mL磷酸（5.3），用水稀释定容至1000mL。

5.121.5%氨水溶液：取1.5mL氨水（5.1），用水稀释定容至100mL。

5.136%甲醇溶液：取6mL甲醇，用水稀释定容至100mL。

5.14绘制标准曲线用样品：取绘制标准曲线用样品、添加20μg/kg羟甲基糠醛的绘制标准曲线用样

品，按本文件规定的方法进行测定，添加20μg/kg羟甲基糠醛的绘制标准曲线用样品的羟甲基糠醛峰

面积（S）与绘制标准曲线用样品羟甲基糠醛保留时间处的峰面积（N）的比值（S/N）应大于10。密封，

-18℃以下保存期24个月。

6主要仪器和设备

6.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器。

6.2分析天平：感量为0.1mg和0.01g。

6.3超声波清洗器。

6.4离心机：转速≥4500rpm。

6.5滤膜：0.22µm，有机相型。

6.6单通道可调移液器：量程为100～1000μL，0.5～5mL，1～10mL。

6.7容量瓶，10mL,25mL

6.8塑料离心管，50mL。

6.9量筒：100mL，1000mL。

6.10玻璃容器：50mL鸡心瓶或者20mL试管。

7试样制备与保存

7.1试样的制备

冷冻样品在0～8℃下16小时内解冻，取适量解冻后的试样，室温下搅拌均匀。

未冷冻的试样直接取适量，室温下搅拌均匀。

2

蜂王浆冻干粉稀释样制备。称取3.00g样品（精确到±0.01g）于50mL烧杯中，加入6.00g（