原核生物基因组.ppt

质粒的生物学特性第31页,共43页，2024年2月25日，星期天（一）质粒的大小和拷贝数1.质粒的大小：以分子质量MD或碱基对数kb表示，1MD的双链DNA=1.65kb。质粒的大小一般在1-200kb，最大的可达1400kb(如苜蓿根瘤菌质粒pRm141a)第32页,共43页，2024年2月25日，星期天2.质粒的拷贝数（copynumber）：指同一质粒在每个细胞中的数量，不同的质粒在同一细胞中的拷贝数有差异。复制子复制起始点+调控元件是确定某种质粒特性的一个重要参数复制子决定其拷贝数第33页,共43页，2024年2月25日，星期天类型代表质粒大小（kb）拷贝数宿主表型特征致育因子F因子95-1001-3大肠杆菌,沙门氏菌,柠檬酸杆菌性纤毛、接合转移R质粒RP4541-3假单胞菌和其它G阴性菌性纤毛、接合转移，抗Ap、Km、Nm、Tc?R1801-3G阴性菌抗Ap、Km、Su、Cm、Sm?R6981-3大肠杆菌,奇异变形杆菌抗Km、Nm、Su、Cm、Sm?R100901-3大肠杆菌,志贺杆菌,沙门氏菌Cm,Sm,Su,Tc,Hg?pSH621?金黄色葡萄球菌Gm,Tm,Km?pAD225?粪肠球菌Em,Sm,KmCol质粒ColE1910-30大肠杆菌产大肠杆菌素E1?ColE2?10-15志贺杆菌产大肠杆菌素E2?ColDF13??阴沟杆菌产大肠杆菌素DF13毒性质粒Ent（P307）83?大肠杆菌产肠毒素?K88质粒??大肠杆菌粘附抗原?ColV-K302?大肠杆菌摄铁载体,免疫机制抗性?pZA1056?金黄色葡萄球菌肠毒素B?Ti200?根癌农杆菌诱导肿瘤代谢质粒CAM230?假单胞菌樟脑降解?SAL56?假单胞菌水杨酰降解?TOL75?恶臭假单胞菌甲苯降解?pJP4??假单胞菌2,4-二氯苯乙酰降解?pSym??根瘤菌共生固氮质粒大小和类型第34页,共43页，2024年2月25日，星期天(二)质粒转移性概念：指质粒能从供体细胞把它的一个复本转移到受体细胞质粒在细菌间的转移，需要供体和受体细胞间的直接接触才能进行，即接合作用可以在同种属也可以不同种属间转移第35页,共43页，2024年2月25日，星期天第36页,共43页，2024年2月25日，星期天（三）质粒的复制复制所需的酶类和复制蛋白DNA聚合酶的利用复制的方向性复制的终止复制起始复制型第37页,共43页，2024年2月25日，星期天复制起点（ori）是一段特定的DNA序列，长约几百碱基对，在其相关的调控元件中含有由质粒或宿主染色体编码的、参与DNA合成起始调控因子的结合位点。在大多数质粒中，与复制有关的蛋白质基因位于它们的作用位点——ori序列附近，因此ori位点周围的小范围DNA是质粒复制所必需的。如果质粒DNA的大部分区域被去掉，而只保留质粒的ori序列，而且质粒是环状的，则质粒仍然能进行复制。分子克隆中利用质粒载体的结构基础。第38页,共43页，2024年2月25日，星期天质粒的复制型θ型复制（主）单向复制双向复制滚环复制第39页,共43页，2024年2月25日，星期天（四）质粒的标记选择标记：用于鉴别目标DNA(载体)的存在，将成功转化了载体的宿主挑选出来。抗生素抗性基因是目前使用最广泛用于将特殊表型的重组子挑选出来α-互补、插入失活筛选标记：第40页,共43页，2024年2月25日，星期天（五）质粒的不相容性两个质粒在同一宿主细胞中不能共存的现象称为质粒的不相容性第41页,共43页，2024年2月25日，星期天第42页,共43页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第43页,共43页，2024年2月25日，星期天*第一个测序，流感嗜血杆菌，1995年现190多种*****操纵子是原核基因表达调控的一种重要的组织形式大肠杆菌的基因多数以操