(7.1)--A Guide to Yeast Two-Hybrid Expe细胞生物学细胞生物学.pdfVIP

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Techniques

AGuidetoYeastTwo-HybridExperiments

RussellL.Finley,Jr.*

1CenterforMolecularMedicineandGeneticsandDepartmentofBiochemistryandMolecularBiology,WayneStateUniversity

SchoolofMedicine,Detroit,MI48201,USA

*Correspondence:rfinley@

Introductionandfalsenegatives(vonMeringetal.,2002).Moreover,

Theyeasttwo-hybridsystemisapowerfulgeneticassayinterpretationoftwo-hybridresultscanbeconfusedby

forprotein-proteininteractions(Chienetal.,1991;Fieldsthediversityoftwo-hybridsystemsandthevarietyof

andSong,1989).Thesystemhasbeenusedinthou-applicationsandprotocolsthathavebeenused.This

sandsofstudies,whichincludeeverythingfrommap-articlediscussessomeofthecriticalparametersinthe

pingthecontactdomainsforindividualpairsofproteinsdesignandinterpretationoftwo-hybridexperimentsin

toidentifyingtheentireproteininteractionnetwork,orthecontextofthreecommonapplications:binarytwo-

“interactome,”forawholeorganism(BrentandFinley,hybridassays,libraryscreens,andhigh-throughput

1997;Cusicketal.,2005;Fields,2005).Theassayisscreens.

carriedoutinsidethenucleusoftheyeastSaccharomy-

cescerevisiae,wherethetwoproteinstobetestedareFalsePositives

expressedashybridmolecules(Figure1A).OneisfusedAllproteininteractionassaysgeneratefalsepositives

totheDNA-bindingdomain(BD)ofatranscriptionfac-andthetwo-hybridsystemisnoexception.Afalseposi-

torsuchas

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