土壤中纤维素分解菌的分离.ppt

关于土壤中纤维素分解菌的分离一、课题目标简述纤维素酶的种类及作用，从土壤中分离出分解纤维素的微生物，讨论这类微生物的应用价值。二、课题重点与难点从土壤中分离分解纤维素的微生物。（1）纤维素酶分解纤维素生化原理（2）区别选择培养与鉴别培养概念（3）比较纤维素粉培养法与刚果红染色法原理第2页,共24页，2024年2月25日，星期天三、基础知识（一）纤维素与纤维素酶1.纤维素在生物圈的分布；人类以淀粉为主要能量来源，但完全不能消化纤维素，而反刍动物和大量的微生物则主要以纤维素为能量来源。这是因为，在反刍动物的瘤胃中生活着大量的可以分解纤维素的微生物。纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质.植物的根茎叶等器官都含有大量的维生素.地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨.第3页,共24页，2024年2月25日，星期天2.纤维素酶的结构和作用原理纤维素与淀粉都是由葡萄糖组成的，但组成两者的葡萄糖的连接方式不同，因而使两者的形态完全不同。纤维素是由葡萄糖分子按β-1,4糖苷键连接而成的，淀粉是由葡萄糖分子按α-1,4糖苷键连接而成的。纤维素酶(复合酶)内切酶（Cx酶）外切酶（C1酶）葡萄糖苷酶内切酶作用于无定型的纤维素区域，使纤维素断裂成片段又叫纤维二糖水解酶，它可以作用于纤维素的结晶区或小片段纤维素，从糖链末端开始切掉两个葡萄糖分子，产生纤维二糖将纤维二糖分解成葡萄糖。第4页,共24页，2024年2月25日，星期天（二）纤维素分解菌的筛选1.刚果红染色法；2.刚果红染色法的原理。四、实验案例土壤中纤维素分解菌的分离第5页,共24页，2024年2月25日，星期天实验的具体操作步骤如下:1.土样采集?土样采集的方法与本专题课题2类似。土样的采集要选择富含纤维素的环境，这是因为在纤维素含量丰富的环境，通常会聚集较多的分解纤维素的微生物。如果找不到合适的环境，可以将滤纸埋在土壤中，过一个月左右也会有能分解纤维素的微生物生长。2.选择培养?选择培养需要的仪器有：250mL锥形瓶、无菌称量瓶、药匙、1mL和10mL的移液管、天平、摇床、温度计等。第6页,共24页，2024年2月25日，星期天培养基的制备参照课本旁栏中的比例配制。在250mL锥形瓶中装入30mL培养基，用8层纱布做成瓶塞，将瓶口塞紧，再在瓶塞外包裹两层包装纸（或报纸），用线绳扎紧，在121℃下高压蒸汽灭菌20min。选择培养的操作：称取土样20g，在无菌条件下加入装有30mL培养基的摇瓶中。将摇瓶置于摇床上，在30℃下振荡培养1～2d，至培养基变混浊。此时可以吸取0.1mL培养液进行梯度稀释和涂布平板，也可以按课本中所述，重复选择培养的步骤一次，然后再进行梯度稀释和涂布平板。第7页,共24页，2024年2月25日，星期天3.刚果红染色法分离?纤维素分解菌这一步所需要的仪器有：无菌培养皿、涂布器、1mL移液管，装有9mL无菌水的20mL大试管，温箱等。培养基的制备参照课本旁栏中的比例配制。在500mL三角瓶中装入200mL培养基，在121℃下高压蒸汽灭菌20min。倒平板操作：将灭菌后的固体培养基熔化，按无菌操作的要求，在无菌的培养皿中倒入15～20mL培养基，凝固后待用。第8页,共24页，2024年2月25日，星期天制备菌悬液：按照本专题课题1的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释，稀释最大倍数至106。涂布平板：将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1mL，滴加在平板培养基上，用涂布器将菌液涂布均匀，在30℃倒置培养，至菌落长出。每个稀释度下需涂布3个平板，并注意设置对照。刚果红染色的具体操作步骤参照课本［资料三］。第9页,共24页，2024年2月25日，星期天五、课题成果评价（一）培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落：对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。（二）分离的结果是否一致：由于在土壤中细菌的数量远远高于真菌和放线菌的数量，因此最容易分离得到的是细菌。但由于所取土样的环境不同，学生也可能得到真菌和放线菌等不同的分离结果。第10页,共24页，2024年2月25日，星期天1.本实验的流程与课题2中的实验流程有哪些异