分子生物学基本技术定稿.ppt

ddNTPdNTPdNTP与ddNTP的结构第53页,共62页，2024年2月25日，星期天ATGCDNADNAPoldNTP(dNTP*)测序引物*ddATPddTTPddGTPddCTP3'…GATTCCGACCTAGTC5'…CTAAG…CTAAGGCTGGA…CTAAGGCTGGATCA…CTAAGGCTGGATCAG…CTAAGGCT…CTAAGGCTGGAT…CTAAGGCTGGATCAG…CTAAGG…CTAAGGCTG…CTAAGGCTGG…CTAAGGCTGGATCAG(G)…CTAAGGC…CTAAGGCTGGATC…CTAAGGCTGGATCAG第54页,共62页，2024年2月25日，星期天…CTAAGGCTGGATCA…CTAAGGCTGGATC…CTAAGGCTGGAT…CTAAGGCTGGA…CTAAGGCTGG…CTAAGGCTG…CTAAGGCT…CTAAGGC…CTAAGG双脱氧链终止法测序流程3'…GATTCCGACCTAGTC5'…CTAAGGCTGGATCAG第55页,共62页，2024年2月25日，星期天二、自动测序(AutomatedDNASequencing)◆四种不同颜色的荧光染料分别标记的四种不同的ddNTPs。◆PE公司的BigDye测序反应试剂盒。模板DNA(待测序列)测序引物第56页,共62页，2024年2月25日，星期天DNA聚合酶4种dNTP4种ddNTP*A：绿色；G：黄色；C：蓝色；T：红色第57页,共62页，2024年2月25日，星期天变性电泳毛细管电泳第58页,共62页，2024年2月25日，星期天第59页,共62页，2024年2月25日，星期天A：绿色；G：黄色；C：蓝色；T：红色第60页,共62页，2024年2月25日，星期天第61页,共62页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第62页,共62页，2024年2月25日，星期天**Serratiamarcescens粘质沙雷菌(S.marcescens)Mycobacteriumphlei草分枝杆菌(M.phlei)**DNAhybridization.TwoDNAsamplestobecomparedarecompletelydenaturedbyheating.Whenthetwosolutionsaremixedandslowlycooled,DNAstrandsofeachsampleassociatewiththeirnormalcomplementarypartnerandannealtoformduplexes.IfthetwoDNAshavesignificantsequencesimilarity,theyalsotendtoformpartialduplexesorhybridswitheachother:thegreaterthesequencesimilaritybetweenthetwoDNAs,thegreaterthenumberofhybridsformed.Hybridformationcanbemeasuredinseveralways.OneoftheDNAsisusuallylabeledwitharadioactiveisotopetosimplifythemeasurements.**马铃薯基因组DNA经EcoRI消化后的图谱**【A】EnlargedimageofaDNAmicroarray.EachglowingspotinthismicroarraycontainsDNAfromoneofthe6,200genesoftheyeast(S.cerevisiae)genome,witheverygenerepresentedinthearray.ThemicroarrayhasbeenprobedwithfluorescentlylabelednucleicacidderivedfromthemRNAsobtained(1)whenthecellsweregrowingnormallyincultureand(2)fivehoursafterthecell