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核黄素测定试验报告

篇一：试验八荧光光光度法测定核黄素的含量

试验八荧光光度法测定核黄素的量〔见教材p118〕

一.试验目的

1.了解荧光法测定核黄素的原理和方法；

2.学习荧光光度计的操作和使用。

二.试验原理

某些具有π-π电子共轭体系的分子易吸取某一波段的

紫外光而被激发，如该物质具有较高的荧光效率，则会以荧

光的形式释放出吸取的一局部能量而回到基态。建立在发生

荧光现象根底上的分析方法，称为分子荧光分析法，而常把

被测物称为荧光物质。在稀溶液中，荧光强度IF与入射光

的强度I0、荧光量子效率?F以及荧光物质的浓度c等有关，

可表示为IF=K?FI0εbc。式中为比例常数，与仪器的参数固

定后，以最大激发波长的光为入射光，测定最大放射波长光

的强度时，荧光强度IF与荧光物质的浓度c成正比。

核黄素〔维生素B2〕是一种异咯嗪衍生物，它在中性或

弱酸性的水溶液中为黄色并且有很强的荧光。这种荧光在强

酸和强碱中易被破坏。核黄素可被亚硫酸盐复原成无色的二

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氢化物，同时失去荧光，因而样品的荧光背景可以被测定。

OHHO

OHH3CHNOOHOHHOOHH3CH3C－2HH3CH二氢化物在空气中

易重氧化，恢复其荧光，其反响如下：

核黄素的激发光波长范围约为440—500nm〔一般为

440nm〕，放射光波长范围约为510—550nm〔一般为520nm〕。

利用核黄素在稀溶液中荧光的强度与核黄素的浓度成正比，

由复原前后的荧光差数可进展定量测定。依据核黄素的荧光

特性亦可进展定性鉴别。

留意：在全部的操作过程中，要避开核黄素受阳光直接

照耀。

三.仪器与试剂

1.试验试剂：核黄素标准品；冰醋酸；核黄素药片；

连二亚硫酸钠〔保险粉〕或亚硫酸钠

2.试验仪器：荧光光度计〔F-2500型〕天平〔感量

0.0001g〕

3.试验器材

一般试管：

容量瓶：

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移液管：

烧杯：

滤纸：25mL×9100mL×110mL×15mL×11mL×1

50mL×19cm

研钵、漏斗、洗瓶、洗耳球、试管架、移液管架、玻棒：

各1

四.试验内容

1.核黄素标准液〔4×10-6g·mL-1〕

准确称取核黄素4mg，加5mL冰醋酸和适量蒸馏水，置

水浴中避光加热直至溶解。冷却至室温，用蒸馏水定容至

1000mL。转入棕色瓶中。

2.样品液的制备

为了消退药片之间的差异，可取几片药片一起研磨，然

后取局部有代表性的样品进展分析。

将5片核黄素药片称量后磨成粉末，然后从中准确称取

1-2mg有代表性的样品，加0.5mL冰醋酸和适量蒸馏水，置

水浴中避光加热直至溶解。冷却至室温，用蒸馏水定容至

100mL〔假设有沉淀，快速通过定量滤纸干过滤，用该滤液

在与标准溶液同样条件下测量核黄素的荧光强度〕。转入棕

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色瓶中。作样品待测液备用。

3.绘制核黄素的激发光谱和荧光光谱

1〕.固定激发波长λex〔Excitationspectra〕为440nm,

在460-660nm处测定荧光强度，得溶液的放射光谱，在520nm

处得最大放射波长λem。

2〕.再固定放射波长λem〔emissionspectra〕为520nm，

测定激发波长λex为400-500nm处荧光强度，得溶液的激发

光谱，在440nm处得最大激发波长λex。

4.标准曲线制作及样品测定

取8支试管，按下表所示挨次操作。

留意：在测定中假设