a色谱理论与气相色谱法.ppt

色谱法分析法;第一节概述;茨维特使用的色谱原型装置，用来分离植物叶片中的色素。

固定相：固定于管子中的填充物（碳酸钙）；

流动相：将色素提取物置于管子上端，靠重力往下流，同时用石油醚淋洗；石油醚携带试样混合物流过固定相。

色谱柱：管子及填充物;色谱分离原理：

当流动相中携带的混合物流经固定相时，混合物中组分与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分在固定相中停留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。

两相及两相的相对运动构成了色谱法的基础。;二、色谱法分类

1、按两相物理状态分类

气相色谱（气体作流动相??，气－固色谱、气－液色谱

液相色谱（液体作流动相），液－固色谱、液－液色谱;2、按固定相的形式分类

柱色谱：固定相装在色谱柱中(填充柱色谱和毛细管色谱)

纸色谱：以多孔滤纸为载体，以吸附在滤纸上的水为固定相

薄层色谱：以涂渍在玻璃板或塑料板上的吸附剂粉末制成薄层作固定相;

3、按分离过程中物理化学原理分类

吸附色谱：吸附剂表面对不同组分的物理吸附性能差异

分配色谱：不同组分在两相中有不同的分配系数

离子交换色谱：利用离子交换原理

排阻色谱：利用多孔性物质对不同大小分子的过滤作用

亲和色谱法：利用与亲和性差异实现分离

按其它原理：凝胶色谱，类似排阻色谱，渗透原理

超临界流体色谱：特殊流动相

;三、色谱法的特点

（1）分离效率高 复杂混合物，有机同系物、异构体。

（2）灵敏度高可以检测出10-6～10-9g的物质。

（3）分析速度快

一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。

（4）应用范围广几乎所有的化学物质。

不足之处：

被分离组分（未知物）的定性较为困难。

;四、色谱分离过程及有关术语

1、色谱分离过程;2、色谱常用术语;（1）色谱峰

组分从色谱柱流出，检测器对该组分的响应信号随时间变化所形成的峰形曲线。;（2）基线

在正常操作条件下，仅用流动相通过色谱柱时，检测器响应信号随时间变化的曲线称为基线。;（3）色谱峰高

色谱峰顶点到基线的垂直距离（高度）称为色谱峰高。;（4）色谱峰的区域宽度

色谱峰的区域宽度是组分在色谱柱中谱带扩张的函数，可以反映色谱柱的分离效能。在能够将组分分开的情况小，峰的区域宽度越窄越好。

度量色谱峰的区域宽度通常有三种方法：

（i）标准偏差σ：它是0.607倍峰高处色谱峰宽度的一半(EF/2);（ii）半高峰宽W1/2：峰高一半处对应的色谱峰宽(GH)

W1/2＝2.354σ;（iii）色谱峰底宽Wb：色谱峰两侧拐点作切线与基线交点间的距离(IJ)。

Wb＝4σ;（5）保留值

试样各组分在色谱柱中保留行为的量度。

它反映了组分与固定相之间相互作用的大小

;（i）保留时间tR：试样从进样开始到柱后出现峰极大值所需的时间。相应于试样到达柱末端的检测器所需的时间。;（ii）死时间t0：不被固定相保留（吸附或溶解）的组分从进样到色谱图上出现峰最大值所需的时间。;（iii）调整保留时间tRˊ：

扣除死时间后的保留时间tRˊ＝tR－t0

(iv)保留体积VR：指从进样到出现某组分的色谱峰最大值时所通过流动相的体积。

若色谱柱出口处流动相流量为F0（ml/min），则

VR＝tRF0

（v）死体积V0：死时间内通过色谱柱流动相的体积

V0＝tMF0

V0：实际上是色谱柱内流动相所占的体积。

;（vi）调整保留体积VRˊ：

VRˊ＝VR－V0

（vii）相对保留值γ2.1：在相同操作条件下，两组分的调整保留值之比。;讨论：

γ2.1只与柱温及固定相的性质有关，而与柱径、柱长、填充情况及流动相流速无关。色谱法中，特别是气相色谱法中，广泛使用的定性数据；

γ2.1是调整保留值之比，而不是保留值之比；

可表示色谱柱的选择性，γ2.1越大，两组分的tR’值相差越大，越易分离；当γ2.1＝1时，重叠。

保留值又是色谱分离过程热力学性质的重要参数；;从色谱流出曲线，可以得到许多重要信息

（1）色谱峰数目——可以判断试样中所含组分的最少个数。

（2）色谱峰保留值（或位置）——可以进行定性分析。

（3）色谱峰下的面积或峰高——可以进行定量分析。

（4）色谱峰的保留值及其区域宽度——是评价色谱柱分离效能的依据。

（5）色谱峰两峰间的距离——是评价固定相和流动相