链霉素发酵提取工艺.pptVIP

链霉素的发酵提取工艺一、概述 链霉素（streptomycin）是一种氨基葡萄糖型抗生素，分子式C21H39N7O12。1943年美国S.A.瓦克斯曼从链霉菌中分离得到，是继青霉素后第二个生产并用于临床的抗生素。它的抗结核杆菌的特效作用，开创了结核病治疗的新纪元。从此，结核杆菌肆虐人类生命几千年的历史得以有了遏制的希望。（一）链霉素及其理化性质链霉素是氨基糖苷类抗生素。链霉素分子由链霉胍、链霉糖和N-甲基-L葡萄糖胺组成的三糖苷，在1，3-位置上带有2个胍基的l，3-去氧青蟹肌醇，去掉2个脒基后称为链霉胺。链霉糖是带有支链的5’-脱氧五碳糖，在第3碳上有一个醛基。N-甲基-L-葡萄糖胺是在第2碳上的-NH2被甲基化(-CH3NH)的L-葡萄糖胺。这三糖连接的糖苷键都是α型的糖苷键。结构式链霉素对许多革兰阴性杆菌如大肠埃希菌、肠杆菌属、沙门菌属等也具抗菌作用；脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌亦对该品敏感。链霉素对葡萄球菌属及其他革兰阳性球菌的作用差。各组链球菌、铜绿假单胞菌和厌氧菌对该品耐药。链霉素主要与细菌核糖体30S亚单位结合，抑制细菌蛋白质的合成。细菌与链霉素接触后极易产生耐药性。链霉素和其他抗菌药物或抗结核药物联合应用可减少或延缓耐药性的产生也用于结核病的二线治疗，多与其它抗结核药合用。(一)斜面孢子培养 将砂土管(或冷冻管)菌种接种到斜面培养基上，经培养后即得原始斜面。 斜面培养基的主要成分有葡萄糖、蛋白胨和豌豆浸汁等，其中蛋白胨和豌豆浸汁的质量对斜面孢子质量影响很大。蛋白胨是最关键的原材料，对产孢子数量的影响不容忽视。豌豆的品种和产地以及培养基的pH值(以中性或偏酸性为宜)对产孢子质量亦有影响，需特别注意。(一)斜面孢子培养 原始斜面的质量要求：菌落分布均匀，密度适中，颜色洁白，单菌落丰满。再由原始斜面的丰满单菌落接种至斜面上，长成后即得生产斜面，斜面上的菌落应为白色丰满的梅花型或馒头型，背面为淡棕色色素，排除各种杂型菌落。经过两次传代，可以达到纯化的目的，排除变异的菌株。生产斜面孢子的质量需要用摇瓶试验进行控制。合格的孢子斜面贮存在冰箱(0－4℃)内备用。(二)摇瓶种子培养 生产斜面的菌落接种到摇瓶培养基中，经过培养即得摇瓶种子。链霉素发酵经常使用：瓶种子来接种种子罐。种子质量以菌丝阶段、发酵单位、菌丝黏度或浓度、糖氮代谢、种子液色泽和无杂菌检查为指标。摇瓶种子(母瓶)可以直接接种子罐，也可以再扩大培养，用培养所得的子瓶接种。摇瓶种子检查合格后，贮存于冷藏库内备用，冷藏时间最多不超过7天。摇瓶培养基的成分为黄豆饼粉、葡萄糖、硫酸铵、碳酸钙等，其中黄豆饼粉的质量和葡萄糖的用量对种子质量都有影响。葡萄糖用量多少对菌种的氨氮代谢和菌丝黏度有影响。在配制摇瓶培养基时，应凋整好配比。(三)种子罐扩大培养种子罐培养是用来扩大种子量的。种子罐培养为1—3级，可根据发酵罐的体积大小和接种量来确定。第一级种子罐一般采用摇瓶种子接种，2—3级种子罐则是逐级转移，接种量一般都为10％左右。种子质量对后期发酵的影响甚大，因此种子必须符合各项质量要求。故在培养过程中，必须严格控制好罐温、通气搅拌和泡沫控制，以保证菌丝生长良好，得到合格的种子。(四)发酵培养链霉素的发酵培养基主要由葡萄糖、黄豆饼粉、硫酸铵、玉米浆、磷酸盐和碳酸钙等所组成。(2)氮源 有机氮源包括黄豆饼粉、玉米浆、蚕蛹粉、酵母粉和麸质水，其中以黄豆饼粉为最佳。无机氮源以硫酸铵和尿素为最常用，氨水可作无机氮源使用，又可调节发酵pH。采用黄豆饼粉浸液(pH6.0，38—40℃处理2h)作为氮源，其发酵单位高峰出现比未处理者为早，这说明可溶性氮比不溶性氮易于利用，对缩短周期有好处。(3)其他无机离子 在复合培养基中已经存在，一般就不需再添加。为了调节pH，中和代谢过程中所产生的有机酸，尚需加人CaCO3。Co+是一种酶的激活剂，又是生物合成维生素B12的前体，通常需加入极微量，K+有促进生长的作用，Na+与维持细胞渗透压有关，通常加入0.25％左右量的NaCl即可，增加用量会明显影响菌的生长繁殖。Mn2+、Mg2+对链霉菌菌丝生长有明显作用。Fe2+浓度超过60ug／mg以上，就要产生毒性，显著影响链霉素的产量，而对菌丝体生长影响较小，一般适用量在20ug／ul左右。2．链霉素的发酵条件及中间控制(1)通气和搅拌：灰色链霉菌是一种高度需氧菌。在黄豆饼粉培养基内增加通气量能提高发酵单位，又能使pH升高。4)中间补料控制：为了延长发酵周期，提高产量，链霉素发酵采用中间补碳、氮源，通常补加葡萄糖、硫酸铵和氮水，这样还能调节发酵的