基因工程的基本操作程序(第1课时)(课件)高二生物(人教版2019选择性必修3).pptxVIP

第1课时：步骤一、二第一章第2节基因工程的基本操作程序

培育转基因抗虫棉的简要过程与载体拼接普通棉花（无抗虫特性）棉花细胞抗虫棉

（有抗虫特性）导入抗虫基因重组DNA分子1.目的基因的筛选与获取2.基因表达载体的构建3.将目的基因导入受体细胞4.目的基因的检测与鉴定

(1)概念：在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因。(2)实例：与生物抗逆性、优良品质、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关的基因。主要指的是编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子。1、目的基因资料：苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌伴胞晶体蛋白（Bt抗虫蛋白），破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫。科学家将“杀虫基因”转入棉花中，棉花产生Bt抗虫蛋白抵抗虫害。目的基因那么，如何筛选目的基因呢？

筛选方法从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选已知结构科学家掌握了Bt基因的序列信息功能清晰Bt抗虫蛋白只在某类昆虫肠道的碱性环境中才表现出毒性，对人和牲畜无影响2、目的基因的筛选

2、目的基因的筛选测序技术测定核酸和蛋白质序列序列数据库以碱基顺序或氨基酸残基顺序为基本内容的分子生物信息数据库序列比对工具把感兴趣的序列跟已经存在的序列数据库进行比较的工具。通过比对识别相关的序列，从而能获得目的基因和蛋白质的功能利用测序技术、序列数据库（如GenBank）、序列对比工具（如BLAST）等，找到合适的目的基因

3、目的基因的获取从基因文库中获取基因组文库含有某种生物全部基因片段的重组DNA的克隆群体cDNA文库含有某种生物部分基因片段的重组DNA的克隆群体cDNA：先由mRNA在逆转录酶作用下获得单链DNA，再利用DNA聚合酶，将单链DNA复制，产生双链DNA，即为cDNA。概念：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。

3、目的基因的获取人工合成法在已知目的基因核苷酸序列且基因较小的情况下，利用DNA合成仪自动合成化学方法直接人工合成

3、目的基因的获取90℃高温DNA在体外90℃高温时变性会变成单链50℃低温引物与单链按碱基互补配对的原则结合72℃适温DNA聚合酶在最适反应温度，沿着磷酸到五碳糖(5-3)的方向合成互补链反应原理DNA半保留复制反应条件缓冲液、DNA模板、4种脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶、与两条模板链结合的2种引物利用PCR扩增目的基因阅读P77，获取PCR的定义、条件、大致过程。

耐高温的DNA聚合酶(Taq酶）4种脱氧核苷酸（DNTP）引物待扩增的DNA片段（模板）5’5’变性复性延伸温度上升到90℃以上，双链DNA解聚为单链当温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。温度上升到72℃左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下合成新的DNA链。

思考：1.PCR技术与DNA复制过程比较？PCR技术DNA复制相同点原则原料条件不同点解旋方式场所酶结果碱基互补配对四种脱氧核苷酸模板、能量、酶DNA在高温下变性解旋解旋酶催化体外复制细胞内（主要在细胞核内）耐高温的DNA聚合酶解旋酶、DNA聚合酶大量的DNA片段形成整个DNA分子

思考：2.PCR技术获取目的基因时至少要经过几次循环才能从DNA分子中

分离出目的基因？3.需要引物的原因？答：DNA聚合酶不能从头合成DNA，只能从引物的3′端开始延伸DNA链。

琼脂糖凝胶电泳DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷，在电场的作用下，这些带电分子会向与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就叫电泳。思考：4、如何对产物进行鉴定？

1.下列有关体内DNA复制与PCR技术比较的叙述，错误的是A.二者子链的延伸方向相同，均为5′端→3′端B.二者均需要解旋酶破坏氢键来实现解旋C.体内DNA复制需要能量，PCR反应也需要能量D.二者遵循的碱基互补配对原则相同√

2.(2022·天津一中高二期中)下图表示利用PCR技术扩增目的基因的部分过程，其原理与细胞内DNA复制类似。下列叙述错误的是A.耐高温的DNA聚合酶总将游离的脱氧核苷酸连接到3′端B.在第三轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段C.引物之间或引物自身发生碱基互补配对，则不能有效扩增目的基因D.从理论上推测，第三轮循环产物中含有引物A的DNA片段占3/4√

DNA片段基因1基因2基因3放大终止子非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游启动子原核基因知识补充基因的结构编码区：编码蛋白质的合成非编码区：不能编码蛋白质，调控遗传信息的表达转录RNA聚合酶识别和结合位点结束