培养基的制备.ppt

培养基的制备

--以普通固体培养基为例实验目的掌握常用培养基制备的基本程序，会测定并矫正培养基的pH值实验器材三角瓶、烧杯、试管、平皿、量筒、玻棒、天平、药匙、高压蒸汽灭菌锅、精密pH试纸、棉塞、棉绳、牛皮纸等。牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂粉、1mol/L氢氧化钠制备培养基的基本要求由于细菌种类繁多，营养需要各异，培养基类型也很多，但制备的基本要求是一致的，具体如下：（1）培养基应含有细菌生长繁殖所需的各种营养物质。（2）培养基的PH应符合细菌生长繁殖的要求。（3）培养基应均质透明，便于观察其生长性状及生命活动所产生的变化。（4）制备和盛装培养基所用容器不应含有任何抑菌物质，最好不用铁锅或铜锅。（5）培养基及盛培养基的玻璃器皿必须彻底灭菌，不得含有任何活细菌。细菌牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂碳源氮源磷酸盐维生素支持物无机盐能源培养基中各成分的主要作用培养基制备的流程试验方法与步骤1.准确称量牛肉膏1.5g;蛋白胨5.0g;NaCl2.5g;水500ml与铝锅内，置电池炉加热，使各成分溶解。2.用精密pH试纸测定溶液PH值，通过滴加1N/mol的氢氧化钠使锅内溶液的pH矫正到7.4～7.6范围内3.加入10-15g琼脂粉，继续加热直至琼脂粉完全溶解（锅内溶液澄清透明为止）。4.倒入量筒内，补足水分至500ml。5.分装在盐水瓶内，塞好橡皮塞，加盖纱布，用棉线包扎好。试验方法与步骤6.高压蒸气灭菌器内进行灭菌，0.105Mpa压力，温度在121.3℃，维持20min即可。7.灭菌完毕等指针降到0处或者等指针降到0.05Mpa时采取间断性放气直至指针回到0处，方可打开取出。8.待培养基冷却后60℃左右，倒少量与灭菌的培养皿内放入37℃的恒温箱培养24-48h，做无菌检验。9.所做培养基经检验合格后放冰箱内冷藏保存，备用。PH的测定方法1.精密PH试纸法取PH范围适宜的精密PH试纸，剪一小片，蘸以待检测的培养基，并立即与所附的比色样片比较，然后向培养基中缓慢加入1N/mol的氢氧化钠溶液，边加入边搅拌边比色，直到PH试纸的颜色与所需的PH比色标准样片的颜色相当为止。如果所制备的培养基数量较大，可先取部分培养基作样品，按上述方法调整PH值，记录的需要的NaOH的用量，按比例计算出全部培养基所需NaOH的总量，将其加入培养基中即可。PH的测定方法2.标准比色管法取3支与标准比色管（pH7.6）相同的空比色管，其中一管加蒸馏水5mL，另外两管各加待测的培养基5mL，其中一管内加0.02%酚红（PR）指示剂0.25mL（滴定管），混匀。按图所示排列，比色箱对光观察。若滴定管色淡或黄色，即表示培养基偏酸性，需滴加0.1mol/L氢氧化钠校正；若呈深红色，即表示偏碱性，应该倒了重做，不可以用盐酸来矫正；通常未校正前的肉汤均呈酸性。记下用去的氢氧化钠的量，由此计算出校正全量培养基所需1mol/L氢氧化钠溶液量。全量培养基加入1mol/L氢氧化钠溶液的总毫升数=5mL培养基用去的0.1mol/L氢氧化钠的毫升数×培养基总毫升数/5×1/10。PH比色架

1.对照管2.标准比色管3.检查管4.蒸馏水管

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