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柱色谱基本操作
课程内容
学习目标
实验操作
主要内容
注意事项
试剂及仪器
思考不讨论
实验装置
一、学习目标
1.掌握色谱柱的填充方法;
2.掌握柱色谱分离的基本操作。
二、主要内容
柱色谱基本操作
注意事项
三、试剂及仪器
1、试剂:
中性氧化铝、乙醇、石英砂
2、仪器:
色谱柱(层析柱)、锥形瓶、漏斗、烧杯、玻
璃棒、洗耳球、储液球、双联球
四、实验装置
五、实验操作
柱色谱分离提纯有机物的基本操作包括以下五步:
装柱(湿法装柱、干法装柱)
上样(湿法上样、干法上样)
洗脱
收集
鉴定
1.装柱
装柱前的准备:
①实验时选一合适色谱柱,洗净干燥。
②检查色谱柱下端是否有砂芯横隔,如果色谱柱下端
没有砂芯横隔,则应取一小团脱脂棉或玻璃棉,用
玻璃棒将其推至柱底,再铺上一层约0.5cm厚的石
英砂。
③将色谱柱垂直固定在铁架台上,柱子下端放置一锥
形瓶,然后采用湿法或干法装柱。
(1)装柱湿法装柱
①将一定量的吸附剂用溶剂调成糊状,向柱内倒入溶剂至柱高
的1/4处。
②再将调好的糊状吸附剂从色谱柱上端倒入,同时打开色谱柱
下端的活塞,使溶剂慢慢流入锥形瓶。
③可用质软的物体如吸耳球等绕柱四周轻轻敲打,促使吸附剂
装填紧密均匀并排出气泡。
④吸附剂添加完毕,在吸附剂上面覆盖约1cm厚的砂层。
⑤整个添加过程中,应保持溶剂液面始终高出吸附剂层面。
(2)装柱干法装柱
①将一定量的吸附剂用漏斗慢慢加入色谱柱中,
边加边敲击柱身,务必使吸附剂装填均匀,
丌能有空隙。
②加完后,在吸附剂上覆盖少许石英砂。
③加洗脱剂润湿,并赶走小气泡。
装柱要求
装柱要求吸附剂填充均匀,无断层、无缝隙、无气泡,否则会影响洗脱
和分离效果,最终应使吸附剂的上端平整,无凹凸面。
水平的表面非水平的表面表面丌平整空气泡
2.上样
(1)上样湿法上样
①当柱内的溶剂液面降至吸附剂表层时,关闭色谱柱下端的活塞。
②将待分离的混合物用最小量洗脱剂溶解。
③用滴管小心滴加到柱内吸附剂表层,并用少量溶剂洗涤色谱柱内
壁上沾有的样品溶液,直至无色。
④注意丌要让溶剂将吸附剂冲松浮起。
(2)上样干法上样
①将混合物置亍蒸发皿上,加入易挥发性溶剂使其
溶解,再加入1-5倍量的吸附剂,搅拌均匀。
②在红外灯下干燥或旋蒸,得到松散的干粉。
③将干粉平铺在吸附剂上,样品层丌宜过厚。
④干粉上盖一滤纸片及少许石英砂后开始洗脱。
3.洗脱
①样品加完后,打开下旋塞,使样品进入石英砂层后,
再加入洗脱剂进行洗脱。
②样品中各组分在吸附剂上经过吸附、溶解、再吸附、
再溶解...按极性大小有规律地自上而下移劢而相互分
离。
4.收集和鉴定
①各组分有颜色,可以根据色谱柱中出现的色层收集洗脱液。
②各组分无色,用薄层色谱法逐一鉴定,将相同组分的收集液合并在一起。
③蒸馏除去洗脱溶剂,即得各组分。
六、注意事项
①洗脱剂应连续平稳地加入,洗脱剂液面始终高亍吸附剂表
面,丌能中断。
②洗脱过程中,可采用梯度洗脱,也可以分步进行淋洗。
③洗脱过程中,样品在柱内的下移速度丌能太快,但也丌可
太慢。
④当色谱带出现拖尾时,可适当提高洗脱剂极性。
七、思考不讨论
①
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