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常用病毒性疫苗的制备
-以鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗为例一、实验目的掌握鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗的制备程序。二、实验器材鸡新城疫Ⅰ系苗毒种、受精蛋、孵化箱、无菌生理盐水、5%碘酊、75%酒精、灭菌镊子、无菌吸管、灭菌瓶、青霉素、链霉素、无菌注射器、酒精灯、超净工作台等。常用病毒性疫苗的制备
-以鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗为例三、实验方法1.毒种由中国兽药监察所负责鉴定、保管和供给。对鸡胚的最小致死量不低于10-6、0.1毫升。鸡胚于接种后24~72h内死亡,胚体病变明显。对红细胞凝集价在1:80以上。毒种对鸡的最小免疫量不低于10-6、0.1毫升。安全无菌。常用病毒性疫苗的制备
-以鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗为例2.Ⅰ系苗湿苗的制造(1)鸡胚选择与孵化健康种鸡所产的新鲜卵。38.5~39℃、相对湿度60%~70%、孵化9~11日龄。鸡胚接种前,应照蛋挑选活力强的发育胚,并划好气室部位和接种部位。常用病毒性疫苗的制备
-以鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗为例(2)病毒的鸡胚培养无菌生理盐水将毒种作1:100倍稀释,接种9~11日龄鸡胚的尿囊腔内,每胚0.1ml,接种后继续置孵化箱内孵化。以后每日上下午各照蛋1用石蜡将接种孔封闭,次。胚胎应于接种后24~48h内死亡(一般多在36h前后死亡)。将死胚立即取出,气室向上,置0~10℃冷却4~24h,凡在24h内和48h后死亡的胚均弃去不用。常用病毒性疫苗的制备
-以鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗为例(3)病毒的收获将冷却后的死胚取出,气室部向上并涂擦5%碘酊,用灭菌镊子敲破气室部位的卵壳并剔除之,揭出卵壳膜,剪破绒毛尿囊膜和羊膜,以无菌吸管吸取尿囊液,装入灭菌瓶内,若干胚的胚液混合为一组。常用病毒性疫苗的制备
-以鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗为例(4)收毒后处理每毫升病毒液加入青霉素和链霉素各500单位,放入冰箱保存,经检验合格后即成疫苗。收获的鸡胚液应逐瓶进行无菌检验,即每瓶抽疫苗0.2ml,分别接种于鲜血琼脂斜面和厌气肉肝汤培养基内,在37℃培养72h,应无细菌生长。然后将无菌生长之疫苗混合后,分别装小瓶或安瓿内,0.5~1ml/瓶。瓶上注明疫苗名称、批号及收获日期。以上各项操作均要在无菌室或无菌罩内无菌操作进行,要严防鸡新城疫强毒污染。常用病毒性疫苗的制备
-以鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗为例3.疫苗检验(1)无菌检验每批疫苗任抽5瓶作为样品,供作无菌检验,方法同上,应无细菌生长。在做细菌培养的同时,亦可注射小鼠若干,每只皮下注射0.2ml,观察10d,应全部健活。若有细菌生长或小鼠死亡者,此苗废弃。常用病毒性疫苗的制备
-以鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗为例(2)安全试验用4~12月龄未经鸡新城疫疫苗免疫的健康鸡3只,每只鸡肌注100倍稀释疫苗1ml,观察10~14d,应无任何反应,或有轻度反应,且在14日内恢复者,认为合格。有严重反应不能康复者,应重复检测一次。常用病毒性疫苗的制备
-以鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗为例(3)效力试验方法一每批疫苗抽样1瓶,用无菌生理盐水将疫苗按其含毒量稀释成10-5,接种10日龄的鸡胚5个,每胚尿囊内接种0.1毫升。鸡胚应在24-72h全部死亡。胎儿有明显的病变。混合鸡胚液对1%鸡红细胞的凝集价在1:80以上者为合格。常用病毒性疫苗的制备
-以鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗为例方法二选4~12月龄的健康鸡若干只,分为试验组和对照组。试验组每只鸡以105倍稀释疫苗肌肉注射1毫升,或用钢笔尖蘸取1000倍稀释的疫苗于翅膀内侧无血管处皮下刺种2次。观察14天,与对照组一起以鸡新城疫强毒攻击。剂量为每只鸡肌注1000倍稀释的新鲜鸡胚强毒液1毫升,观察10~14天,试验组免疫鸡全部健活,对照组全部发病,并至少死亡2/3,方能合格。如果对照鸡不能全部发病,或虽全部发病而死亡少于2/3,可重复试验一次。如免疫鸡发病或死亡时,这批疫苗应视为无效,予以废弃。
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