薄层色谱操作技术课件讲解.ppt

江苏农牧科技职业学院动物药学院仪器分析技术薄层色谱分离分析技术——薄层色谱操作技术3、展开2、点样1、制板4、检视薄层色谱操作技术主要包括四个步骤仪器分析技术一、制板仪器分析技术1、自制薄板无黏合剂：将固定相直接涂布玻璃板上。含黏合剂：固定相中加煅石膏（10%～15%）、羧甲基纤维素钠水溶液（0.2%～0.5%）。具体操作如下2、市售薄板普通薄层板：玻璃、聚酰胺薄膜、铝基薄层板高效薄层板：固定相粒径为5-7μm自制薄板的操作方法将1份固定相和3份水（或羧甲基纤维素钠水溶液）在研钵中沿同一方向研磨混匀，去除表面的气泡后，置玻璃板上使涂布均匀，或倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(涂层厚度为0.2mm～0.3mm)，取涂好的薄层板，置水平台上于室温下晾干后，在110℃活化30分钟，立即置于有干燥剂的干燥器中备用。手动涂布器仪器分析技术市售薄板临用前的处理一般应在使用前110℃活化30分钟，聚酰胺薄膜不需活化，铝基片薄层板和聚酰胺薄膜可根据需要剪裁，但需注意剪裁后的薄层板底边硅胶层不得有破损，如存放期间被空气杂质污染，使用前可用甲醇、二氯甲烷和甲醇的混合溶液在展开容器中上行展开预洗，取出、晾干，110℃活化后，置干燥器中备用。硅胶类薄层板仪器分析技术每次点样后，使其自然干燥或将其吹干，只有干后，才能第二次点样；点样时勿损伤薄层表层，不得出现凹点，不可刺出空洞。二、点样仪器分析技术普通板点样基线：距底边2.0cm圆点状：直径≤3mm条带状：点样宽度5～10mm点或条带间距：＜8mm点样量：＜10μl高效板点样基线：距底边0.8～1cm圆点状：直径R≤2mm条带状：点样宽度4～8mm点或条带间距：＜5mm点样量：＜5μl三、展开同一物质在同一薄层板上出现中间部分的Rf值比边缘部分的Rf值小，这种现象称为边缘效应，所以展开缸预先用展开剂饱和可避免此效应。要求：将点好样的薄层板放入展开缸中，浸入展开剂的深度为距薄层板边0.5-1cm，密封顶盖待展开至规定的距离，如20cm的薄层板，上行距离为8-10cm，高效薄层板上行距离为5-8cm，取出薄板在前沿处做好标记，晾干，待检。仪器分析技术展开方式展开方式有:上行、近水平、双向、多次展开上行展开近水平展开仪器分析技术四、检视仪器分析技术在日光下直接检视化学检出法：利用化学试剂与被测物质反应，使斑点产生颜色而定位，显色的方法有：喷雾法、熏蒸法、浸渍法。荧光检出法：对无色物质可在紫外灯下，观察有无暗斑或荧光斑点，并记录其颜色、位置、强弱；有荧光的物质或显色后激发产生荧光的物质可在紫外灯（254nm或365nm）下观察荧光斑点。有色物质斑点无色物质斑点谢谢观看！仪器分析技术