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rAd-ORF2-γ-IFN重组腺病毒灭活疫苗的制备与免疫效果研究的开题报告
题目：rAd-ORF2-γ-IFN重组腺病毒灭活疫苗的制备与免疫效果研究
一、研究背景和目的
传染性肝炎是一种通过血液传播的病毒性疾病，由乙型和丙型肝炎病毒引起。其中，乙型肝炎病毒（HBV）是一种DNA病毒，世界上有超过3亿人携带HBV，其中约1000万人患有严重的肝病，每年有超过60万人死于HBV相关的肝病。因此，开发有效的乙型肝炎疫苗对于减少乙型肝炎病毒感染和肝病的发生具有重要意义。
目前，乙型肝炎疫苗以不活化疫苗和重组疫苗为主。不活化疫苗较为安全，但由于免疫原性差，需要多次免疫才能产生充分的免疫反应；重组疫苗免疫原性强，但价格较高，不适用于大规模使用。因此，寻找一种具有高免疫原性和安全性的乙型肝炎疫苗非常必要。
近年来，基因工程技术的飞速发展，使得基于腺病毒载体的重组疫苗备受关注。本研究旨在制备一种基于腺病毒载体的乙型肝炎疫苗，并评估其免疫效果。
二、研究内容和方法
1.构建rAd-ORF2-γ-IFN重组腺病毒载体资料
利用重组分子生物学技术，在rAd5载体上，将乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）和干扰素（IFN）的基因序列插入到载体的外源转录单元（IRES）之间，构建rAd-ORF2-γ-IFN载体。
2.生产rAd-ORF2-γ-IFN重组腺病毒灭活疫苗
将rAd-ORF2-γ-IFN载体转染293细胞，经过几轮扩增和纯化后，制备得到rAd-ORF2-γ-IFN重组腺病毒灭活疫苗。
3.免疫效果评估
将BALB/c小鼠分为三组，分别注射灭活疫苗、不活化疫苗和PBS（对照组）。在免疫后第14、28和42天，采集小鼠的血清，检测抗体水平；在免疫后第28天，采集小鼠脾脏，检测CD4+T和CD8+T细胞数量和活性。
三、预期结果
本研究将构建一种基于腺病毒载体的乙型肝炎疫苗，并评估其免疫效果。预期可以得到以下结果：
1.成功构建rAd-ORF2-γ-IFN载体，并制备出灭活疫苗；
2.灭活疫苗可以诱导小鼠产生高水平的抗体，抗体水平优于不活化疫苗，有效提高免疫效果；
3.灭活疫苗可以提高小鼠的CD4+T和CD8+T细胞数量和活性，促进细胞免疫反应。
四、意义和应用价值
本研究将基于腺病毒载体制备乙型肝炎疫苗，通过灭活处理，使得疫苗具有更好的安全性。同时，疫苗中包含了IFN基因序列，可以进一步提高其免疫原性和免疫效果。该疫苗可以用于预防乙型肝炎的发生和流行，对于推动我国乙型肝炎防治工作具有重要意义。
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