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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利
(10)授权公告号CN106701729B
(45)授权公告日2019.12.17
(21)申请号201710082165.1(56)对比文件
(22)申请日2017.02.15CN103074322A,2013.05.01,
CN106222157A,2016.12.14,
(65)同一申请的已公布的文献号
CN102839166A,2012.12.26,
申请公布号CN106701729A
审查员徐浩
(43)申请公布日2017.05.24
(73)专利权人南京工业大学
地址211816江苏省南京市浦口区浦珠南
路30号
(72)发明人朱颐申李胜卫姚忠屠春燕
张凡
(74)专利代理机构江苏致邦律师事务所32230
代理人徐蓓尹妍
(51)Int.Cl.
C12N11/08(2006.01)
C12N9/20(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图3页
(54)发明名称
一种以多肽修饰的氨基树脂为载体的固定
化酶及制备方法
(57)摘要
本发明涉及一种以多肽修饰的氨基树脂为
载体的固定化酶及制备方法,固定化酶载体采用
多肽修饰的氨基树脂,所述多肽分别为由长度不
同的亮氨酸或苯丙氨酸残基组成的肽链,链肽羧
端与树脂上的氨基形成肽键偶联在树脂上。本发
明以脂肪酶为目标酶,以氨基树脂为载体,通过
芴甲氧羰基多肽固相合成方法接枝疏水性的氨
基酸链,在氨基树脂表面接枝链长不同的多肽片
段,在载体表面形成一种稳定的疏水性环境,获
得一种表面环境相对疏水的功能性载体;通过物
理吸附将脂肪酶结合于经修饰的氨基树脂上,通
B过疏水等作用力相结合,提高固定化酶的稳定
9性。
2
7
1
0
7
6
0
1
N
C
CN106701729B权利要求书1/1页
1.一种以多肽修饰的氨基树脂为载体的固定化酶,包括脂肪酶和脂肪酶固定化所需载
体,其特征在于,
所述载体为多肽修饰的氨基树脂;
所述的多肽为氨基酸序列为10个亮氨酸残基组成的多肽片段;或10个苯丙氨酸残基组
成的多肽片段;
残基羧基端的羧基与氨基树脂上的氨基形成肽键偶合。
2.一种以多肽修饰的氨基树脂为载体的固定化酶的制备方法,其特征在于,包括如下
步骤:
1)树脂载体的制备;
采用芴甲氧羰基多肽固相合成法,将芴甲氧羰基保护的氨基酸与氨基树脂上的氨基形
成肽键偶联到氨基树脂上,并根据设计需求延长氨基酸链长度,得到经多肽修饰的氨基树
脂载体;步骤如下:
①将氨基树脂溶胀;
②按照氨基酸序列中的从羧基端到氨基端的顺序,依次将芴甲氧羰基保护的氨基酸偶
联到树脂上;
其中,所述的芴甲氧羰基保护的氨基酸为芴甲氧羰基-L-亮氨酸或芴甲氧羰基-L-苯丙
氨酸,两种氨基酸的氨基酸链长度均为10;
偶联过程中,使用的缩合试剂为1-羟基苯并三唑和N,N-二异丙基碳酰亚胺的组合物;
氨基树脂位点数、氨基酸、1-羟基苯并三唑和N,N-二异丙基碳酰亚胺的物质的量的比为1:
3:3:3;
③使用含20%v/v哌啶的N,N-二甲基甲酰胺溶液,反应10
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