基因工程第5章 目的基因的获得.docVIP

第五章目的基因的获得

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第一部分目的基因

·什么是目的基因

●目的基因的作用

●如何得到目的基因

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中心法则

DNA→RNA→蛋白质

DNA

mRNA/RNAPolymerase

Transcription

Ribosomes

Forming

结构基因的基本组成

·转录启动区

●核糖体识别区

●编码区

·转录终止区

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1原核生物基因的组成

●启动区

·SD区

●基因编码区

·转录终止子和终止因子

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为mRNA,合成

为mRNA,合成

能转

达的核苷酸序列

非编码区编码区-非编码区—

非编码区

编码区-

催化DNA转

催化DNA转为RNA

酶结合位点一

原核生物的基因结构

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1.1

1.1基因编码区

Thelacoperonincludescis-actingregulatorelementsandprotein-codingstructuralgenes

PPOlacZlacYlacAlacl

P

PO

lacZ

lacY

lacA

DNA/

8235108257801040

82

3510

825

780

mRNA

β-galactosidasePermeaseTransacetylaseProtein

β-galactosidase

PermeaseTransacetylase

cvirtualtextwwefrait

·多数以操纵子形式存在，同类功能基因聚集

·同一个启动子

●同一个终止子

●各基因分别有起译码ATG和终止码TAA

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1.2核糖体结合位点(SD序列)

mRNA中起始密码子上游8-13个核苷酸处有一段富含嘌呤核苷酸的顺序，它可以与30S亚基中的16SrRNA3端富含嘧

啶的尾部互补，形成氢键结

合，有助于mRNA的翻译从起

始密码子处开始，因此也称为

核糖体结合位点。

1974年由J.Shine和L.Dalgarno发现，故称为SD序列

TheAUG

TheAUGisprecededbyaShine-Dalgarnosequenc

Bindribosome

toinitiationsiteonmRNA

AddnucleasetodigestallunprotectedmRNA

lsolate

fragmentofprotectedmRNA

Determine

sequenceofprotected

fragment

Allinitiationregionshavetwoconsensuselements

ewrtuattetwwwergitocom

AAACAGGAGGAUUACCCCAUGUCGAAGCAALeaderCodingregion

AUG

incenterofprotected

Shine-Dalgamo

10bases

upstreamofAUG

fragment

—AUG—

AUG

AUG

*

核糖体结合位点(SD序列)

·mRNA上

·起始密码子ATG上游约10bp处的序列区

●富含嘌呤

●保守序列为5AGGAGG3’

●与核糖体小亚基的16SrRNA识别、结合

●SD序列以及SD序列与起始密码子AUG之间的距离决定翻译效率

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1.3启动子

·DNA分子与RNA聚合酶特异结合的部位，也是转录开始的部位·转录原点记为+1,其上游记为负值，下游记为正值

Promotersandterminatorsdefinetheunit

起点

终止子

Startpoint

启动子

TerminatorPromoter

Terminator

-35-10-1+1+10

distalafexIwaw

distal

afexIwaw

上游下游

上游

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