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4例非综合征性唇腭裂患者microRNA的表达分析的开题报告
一、研究背景
唇腭裂(cleftlipandpalate,CL/P)是一种常见的口颌面畸形,其发病率在不同人群中有所不同。综合征性唇腭裂(syndromiccleftlipandpalate,S-CL/P)占10%左右,而非综合征性唇腭裂(non-syndromiccleftlipandpalate,NS-CL/P)则占90%左右,是一种多基因遗传疾病。
在唇腭裂的发生和发展中,microRNA(miRNA)被认为是一个重要的调控因子。miRNA是一种长度约22个核苷酸的小RNA,可以靶向调控多个基因表达,从而发挥广泛的生物学作用。近年来,越来越多的研究表明,miRNA在CL/P的发生和发展中具有重要的作用。
二、研究目的
本研究旨在分析4例NS-CL/P患者和4例正常对照对象miRNA的表达情况,筛选出与NS-CL/P相关的miRNA,并初步探讨其功能。
三、研究内容和方法
研究内容:
1.收集4例NS-CL/P患者和4例正常对照对象的血液样本,提取总RNA。
2.通过高通量测序技术分析miRNA的表达情况,并对测序结果进行分析。
3.运用生物信息学方法对筛选出的差异表达miRNA进行功能注释和通路分析。
4.对筛选出的miRNA进行定量PCR验证。
研究方法:
1.患者招募:从相应医院中选择4例NS-CL/P患者和4例正常对照对象进行研究。
2.分离RNA:采用Trizol方法提取血液样本中的总RNA。
3.构建文库:通过TruSeqSmallRNASamplePrepKit(Illumina)对提取的总RNA进行文库构建。
4.高通量测序:使用IlluminaHiSeq2500平台进行高通量测序。
5.分析差异表达miRNA:使用EdgeR进行miRNA差异表达分析。
6.功能注释和通路分析:使用DIANA-miRPathv3.0对筛选出的差异表达miRNA进行通路分析和功能注释。
7.定量PCR验证:使用SYBRGreenqPCRMasterMix(ThermoFisherScientific)对筛选出的miRNA进行定量PCR验证。
四、研究意义
本研究为进一步研究NS-CL/P的遗传机制提供了重要的理论依据和实验数据。同时,筛选出的差异表达miRNA可供临床诊断和治疗提供新的靶点和方法。
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