基因工程期末总结.pdf

1基因工程狭义上，它是指一种或多种生物体的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体内，

使之按人们的意愿遗传并表达出新的性状。广义上，定义为DNA重组技术的产业化设计与应用，包括上游技

术和下游技术。下游技术包括外源基因的生物细胞的大规模培养和基因表达产物的分离纯化过程。

2限制性内切酶它是一类能识别双链DNA分子中的特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核酸内切

酶。

3粘性末端在内切酶作用下产生的具有互补碱基的单链末端结构

4平末端在同一位点平齐切割DNA两条链而形成的双链末端。

5同尾酶来源不同，识别的靶子序列也不相同，但都能产生相同的粘性末端。

6限制性内切酶的星号活性在非最适合的反应条件下，有些限制性核酸内切酶识别序列的特异性会发生改

变，导致识别序列以外的其他位点切割DNA分子。这种在非最适合条件下产生的内切酶活性称为星号活性。

7DNA连接酶它是一种封闭DNA链上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5-P与另

一DNA链的3-OH生成磷酸二酯键。

8插入失活效应若把外源DNA片段插入到载体的选择标记中而使此基因失活，丧失其原有的表型特征，这

种效应叫插入失活效应。

9载体在基因工程中，将外源DNA片段利用运载工具送入生物细胞中，使其得到扩增。我们将携带外源基

因进入受体细胞的这种工具叫做载体.载体的本质是DNA。

10目的基因通常将那些已被或者准备要被分离、改造、扩增或表达的特定基因或DNA片段，称为目的基因。

11基因组文库它是人工构建的含有某种生物细胞全部DNA序列（全部基因）的克隆群。

12cDNA文库某种生物基因组转录的部分或全部mRNA经反转录产生的各种cDNA片段分别与克隆载体重

组，贮存在一种受体菌群体中，这样的群体称为cDNA基因文库。

13受体细胞所谓受体细胞又称宿主细胞或寄主细胞，是指在转化、转导、杂交中能摄取外源DNA并使其

稳定维持的细胞。

14基因表达生物有机体的遗传信息都是以基因的形式储存在细胞的遗传物质DNA分子上的，而DNA分子

的基本功能之一就是把它所承载的遗传信息转变为由特定氨基酸顺序构成的多肽或蛋白质分子，从而决定生

物有机体的遗传表型。这种从DNA到蛋白质的过程叫做基因的表达

15S-D序列序列富含嘌呤核苷酸，与16SrRNA3’末端的序列互补，是核糖体RNA的识别与结合位点。

@@@问答

一基因工程操作步骤

（1）从供体细胞基因组中，经酶切或PCR等方法分离出含目的基因的DNA片段。然后用限制性内切酶将外

源基因和载体分子切开。（2）用DNA连接酶将外源基因的DNA片段连接到载体分子上，形成重组分子。（3）

借助转化手段将重组DNA分子导入受体细胞中。（4）培养细胞，以扩增重组分子或整合到受体细胞基因组中。

（5）筛选和鉴定转化细胞

二限制性内切酶的命名

1、用细菌属名的第一个字母和种名的头两个字母，组成三个字母的略语表示寄主菌的物种名称（斜体）。如：

大肠杆菌（Escherichiacoli),用Eco表示，流感噬血菌（Haemophilusinfluenzae)用Hin表示。2、用一个非斜

体的标注字母代表菌株或型写在前面三个字母的后面。如，EcoK，EcoB3、如果一个菌株具有几个不同的

限制与修饰体系，则用罗马数字区分。如HindI,HindII

4、所有的限制酶，系统的名称前加上限制酶和甲基化酶的缩写。R.HindI，M.HindI

三目的基因和载体连接的几种方法及其优缺点

①粘性末端的连接载体和外源DNA被同一种酶切割产生相同的粘性末端混合后，DNA连接酶连接缺

点：载体容易发生自我环化作用，在连接酶作用下形成稳定的共价闭合环形结构。

②平末端的连接（1）同聚物加尾法(2)衔接物（linker)连接法a外源DNA被任意切割

b单链延伸末端被外切酶切割，形成平末端c平末端和衔接物被T4DNA连接酶连接d连接后的外源DNA

和载体被同一种酶切割eDNA连接酶连接衔接物的缺点：如果待克隆的DNA片断含有和所加衔接物相同

的限制位点，则在衔接物消化产生粘性末端的同