野生动物腺病毒高通量快速鉴定技术规程.pdf

ICS号

中国标准文献分类号

团体标准

T/YNSOZXXXX-XXXX

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野生动物腺病毒高通量快速鉴定

技术规程

TechnicalstandardforrapidNGSdetectionofwildanimal

adenoviruses—Codeofpractice

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

云南省动物学会发布

野生动物腺病毒高通量快速鉴定技术规程

1范围

本标准确立了野生动物携带或感染的腺病毒的高通量快速鉴定技术的原理、试验步骤。

本标准适用于野生动物腺病毒高通量快速鉴定、野生动物携带或感染的腺病毒评估等研

究。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

GB19489-2008，实验室生物安全通用要求。

3术语和定义

GB19489-2008界定的以及下列术语和定义适用于本文件。

3.1

腺病毒adenovirus,adv

无包膜的双链DNA病毒，直径为70～90nm的颗粒，由252个壳粒呈20面体排列构成。

每个壳粒的直径为7～9nm。壳粒里是线状双链DNA分子，约为30～47kb的碱基序列，两

端各有长约100bp的反向重复序列。

3.2

腺病毒DNA样品advDNAsamples

利用野生动物的组织(如血液、咽拭子、肛拭子等）提取腺病毒基因组DNA。

3.3

纳米孔高通量DNA建库nanoporeDNAlibraryconstruction

将提取或纯化的基因组双链DNA，经修复连接测序接头后磁珠纯化完成文库的构建，从

而实现在齐碳研发的纳米孔基因测序平台进行测序的文库。

3.4

纳米孔高通量测序nanoporesequencing

1

单个核酸分子在电场力驱动和控速蛋白的双重作用下，以连续的单链核酸分子形式穿过

纳米尺寸的蛋白孔道，当不同碱基通过时，会对孔道内的离子电流产生不同程度的阻断，通

过捕捉随时间变化的电流信号实时地识别碱基排列信息，从而实现对核酸分子的测序。通过

纳米孔高通量测序可获得野生动物腺病毒核酸的全基因组信息。

3.5

病毒DNA序列分析sequenceanalysis

通过纳米孔测序仪对病毒DNA进行测序，得到的DNA系列与已知病毒序列数据库比对来

确定病毒的类型。

4符号、代号和缩略语

下列缩略语适用于本文件。

AdV:腺病毒（adenovirus）

DNA:脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid）

5野生动物腺病毒高通量快速鉴定试验步骤

5.1样本选取和保存

腺病毒可感染几乎所有的细胞类型。病毒核酸可从待检野生动物的组织、血液、咽拭子、

粪便等提取,组织、血液、鼻咽拭子、粪便的采集方法参见附录A。病毒样本都宜保存在病

毒核酸保存液中,保存管应存放于超低温冰箱中。整个流程需用到的仪器、耗材、试剂见附

录B。

5.2样本处理及核酸提取

按照商品化的自动核酸提取仪和配套病毒核酸提取试剂盒提取腺病毒基因组DNA。组织

样本宜先使用低温研磨仪进行样本低温研磨、离心后，然后再使用自动核酸提取仪及病毒核

酸提取试剂盒提取DNA。样品DNA提取具体步骤参见附录C。提取的基因组DNA浓度用Qubit

荧光计测定，核酸浓度宜大于等于15ng/ul，核酸总量宜为300ng。DNA完整度较好，260/280

比值范围宜在1.8～2.0；260/230比值范围宜在2.0～2.2。达到上述条件的高质量DNA

宜进行核酸建库反应。否则为风险建库，全基因组信息的获得存在未知性，但是病毒类型可